建立牛乳中万古霉素、去甲万古霉素和替考拉宁的高效液相色谱-串联质谱测定方法.采用多反应监测模式,外标法定量.通过对不同提取溶剂的考察,选择0.1%甲酸水溶液-乙腈溶液(85:15,V/V)作为提取溶剂;牛乳样品经超声辅助提取后,选用阳离子交换柱对万古霉素和去甲万古霉素进行净化,采用C18固相萃取柱对替考拉宁进行净化;流动相选择乙腈-0.1%甲酸水溶液体系,并采用梯度洗脱模式;分析物经反相C18色谱柱分离后,用质谱进行测定.结果表明:万古霉素、去甲万古霉素和替考拉宁的检出限分别为2、1、2μg/kg,定量限(limit of quantitation,LOQ)分别为4、2、4μg/kg;在LOQ、5倍LOQ和10倍LOQ 3个添加水平下,3种分析物的方法回收率为77.3%~84.5%,相对标准偏差为4.7%~7.2%.该方法可用于市售牛乳样品中糖肽类抗生素万古霉素、去甲万古霉素和替考拉宁的检测.