猪流行性腹泻病毒HB2015分离株N基因表达及单克隆抗体的制备

• 作者: 刘斌 祁光宇 赵兴绪
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 N基因 原核表达 单克隆抗体 IFA分析
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医?水产养殖
• 页码范围: 76-80
• 页数: 5页
• 分类号: S858.282.65
• 字数: 3733字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2018.01.011

摘要

根据已经发表的猪流行性腹泻病毒N基因序列(GenBank:KX016034.1),设计1对特异性引物(上、下游分别插入Bam HⅠ和 XhoⅠ酶切位点),通过RT-PCR技术扩增N基因,在测序鉴定正确后经Bam HⅠ和 XhoⅠ双酶切,将其克隆至原核表达载体pET-32a上,获得重组表达质粒pET32a-N.表达的蛋白质经纯化后进行Western blotting鉴定分析.以表达的PEDV-N蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选及亚克隆,获2株PEDV-N特异性单克隆抗体.对获得的单抗进行Western blotting鉴定和间接免疫荧光试验(IFA)分析,结果显示2株单抗均能与PEDV-N蛋白特异性结合和识别.以上结果表明PEDV-N蛋白在大肠杆菌中成功表达,且成功制备了2株具有生物学活性的特异单抗,为建立PEDV金标试纸诊断方法奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵兴绪	甘肃农业大学动物医学院	178	766	13.0	19.0
2	刘斌	甘肃农业大学动物医学院	12	46	4.0	6.0
4	祁光宇	甘肃农业大学动物医学院	8	14	3.0	3.0