基于电化学生物传感技术的鱼类IHNV病毒检测方法构建

• 作者: 张研 江炎亮 许建 赵紫霞 陈强
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 传染性造血器官坏死病毒(IHNV) 鲑科鱼类 电化学信号 生物传感
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 357-364
• 页数: 8页
• 分类号: S941.41+4|O657.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2018.02.019

摘要

本研究旨在开发传染性造血器官坏死病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)现场检测新技术,用于鉴定鱼类苗种是否携带IHNV,降低疫病传播风险,实现水产健康养殖管理.基于IHNV基因组序列保守性分析结果,以保守性最高的基质蛋白编码基因(matrix,M)为检测靶序列,设计了6条IHNV特异性扩增引物,对样品RNA进行逆转录等温链置换扩增.在部分引物5'端标记二茂铁分子,使扩增产物带有电化学信号,在部分底物中标记生物素分子,使扩增产物被亲和素修饰的电极表面捕获锚定,基于该原理构建了电化学生物传感体系,通过检测扩增产物的循环伏安信号,判断样品中是否携带IHNV.本方法能够在15 min内完成核酸扩增,且扩增反应在59～65℃的宽松温度区间内均可进行,无需精准控温,对设备和操作要求较低.在扩增温度63℃、信噪比为3的条件下,本方法最低检测限(limit ofdetection,LoD)为6.2 copies/μL,能够对未表现出感染症状的鲑鳟类鱼苗、鱼卵进行IHNV检测,适用于苗种场、养殖场等生产经营性场所的现场检测,在水产苗种鉴定领域具有良好的应用前景.