家蚕微孢子虫己糖激酶基因的克隆及序列结构分析和原核表达

• 作者: Bismark Kyei 尚瑞沙 张轶岭 彭祥然 徐莉 李孝良 沈中元 陈红丽 齐静茹
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 家蚕微孢子虫 己糖激酶 基因克隆 序列特征 原核表达
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 70-76
• 页数: 7页
• 分类号: Q959.115+.92|Q785
• 语种: 中文
• DOI: 10.13441/j.cnki.cykx.2018.01.009

摘要

己糖激酶(hexokinase,HXK)是糖酵解途径的限速酶,在能量代谢中充当极其重要的角色.家蚕微孢子虫(Nosema bombycis具有完整的糖酵解途径,其基因组中有2个序列相似度较高的己糖激酶编码基因拷贝(NBO_ 1320g0001,NBO_27g0008).根据其中的一个基因拷贝(NBO_27g0008)序列设计特异性引物,以家蚕微孢子虫基因组DNA为模板成功克隆了该基因,命名为Nb HXK-1.该基因大小为894 bp,包含完整的ORF,编码297个氨基酸,预测蛋白质的分子质量为34.241 kD,等电点(pI)为5.26,蛋白质的氨基酸序列有31个磷酸化位点和4个潜在的N-糖基化位点,无跨膜结构域,有信号肽,二级结构主要由α螺旋(54.55％)、延伸片段(17.80％)和无规则卷曲(27.61％)组成.系统进化分析显示NbHXK-1与东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)己糖激酶(NcHXK)氨基酸序列的亲缘关系较近.将Nb HXK-1基因插入原核表达载体pET-28a(+)并转化BL21 (DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达后经蛋白质串联质谱鉴定和Western blot分析显示,获得了与预期大小一致的约35 kD的重组NbHXK-1蛋白,为进一步阐明NbHXK-1的生物学功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张轶岭		6	0	0.0	0.0
2	Bismark Kyei		2	0	0.0	0.0
3	沈中元		17	5	1.0	2.0
4	李孝良		6	0	0.0	0.0
5	彭祥然		6	0	0.0	0.0
6	徐莉		11	1	1.0	1.0
7	尚瑞沙		4	0	0.0	0.0
8	齐静茹		4	0	0.0	0.0
9	陈红丽		5	0	0.0	0.0