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人源性抗食管癌细胞单链抗体的表达纯化及活性鉴定
人源性抗食管癌细胞单链抗体的表达纯化及活性鉴定
作者:
乔媛媛
周丽君
张达矜
熊鸣
王欲晓
瞿秀华
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
蛋白表达
蛋白纯化
活性鉴定
摘要:
目的 研究噬菌体抗体库中筛选得到的抗食管癌细胞的单链抗体的功能,对单链抗体进行包涵体表达纯化.方法 将从噬菌体抗体库中筛选到的2个单链抗体基因分别连接到pET-:28a、pET-SUMO原核表达载体中,分别构建原核表达重组载体pET-NFC20b、pET-NFC70a,将其转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)表达系统中进行融合表达,对诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside,IPTG)浓度、诱导时间和温度等诱导表达条件进行优化.采用盐酸胍稀释滴定复性方法对抗食管癌肿瘤细胞表面抗原的抗体进行复性,并用SDS-PAGE及质谱技术鉴定表达产物.结果 成功构建了重组载体pET-NFC20b、pET-NFC70a,对重组菌株pET-NFC20b、pET-NFC70a蛋白表达进行鉴定,诱导条件为0.5 mmol/L IPTG、时间3 h、温度18 ℃,重组蛋白均以包涵体形式表达,经滴定复性后均获得了相对分子量为30 kD和40 kD的重组蛋白.细胞ELISA实验鉴定2种蛋白NFC20b、NFC70a能与KYSE-170、KYSE-150、SMMC7721、A549等细胞结合,具有生物学活性.结论 噬菌体抗体库中筛选得到的抗食管癌细胞的单链抗体NFC20b和NFC70a,可以成功地构建到pET28a和pET-SUMO载体内进行包涵体表达,纯化后具有蛋白活性,可为后续实验及检测试剂的研发奠定基础.
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文献信息
篇名
人源性抗食管癌细胞单链抗体的表达纯化及活性鉴定
来源期刊
转化医学杂志
学科
医学
关键词
蛋白表达
蛋白纯化
活性鉴定
年,卷(期)
2018,(1)
所属期刊栏目
基础研究
研究方向
页码范围
31-34,38
页数
5页
分类号
R735.1
字数
4747字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.2095-3097.2018.01.008
五维指标
作者信息
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姓名
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1
乔媛媛
海军总医院基础医学研究中心
45
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周丽君
海军总医院基础医学研究中心
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王欲晓
海军总医院基础医学研究中心
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张达矜
海军总医院基础医学研究中心
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熊鸣
海军总医院基础医学研究中心
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瞿秀华
海军总医院基础医学研究中心
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研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
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期刊影响力
转化医学杂志
主办单位:
海军总医院
出版周期:
双月刊
ISSN:
2095-3097
CN:
10-1042/R
开本:
大16开
出版地:
北京市海淀区阜成路6号
邮发代号:
创刊时间:
1988
语种:
chi
出版文献量(篇)
938
总下载数(次)
2
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2219
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