Klebsiella sp.GXK-1的α-L-鼠李糖苷酶的酶学性质

• 作者: 何贺贺 兰青 杜丽琴 王子龙 郑芳芳 郭双双 韦宇拓 黄日波
• 来源期刊: 广西科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 克雷伯氏菌 α-L-鼠李糖苷酶 克隆表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究类
• 页码范围: 290-298,312
• 页数: 10页
• 分类号: Q814
• 字数: 7576字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13656/j.cnki.gxkx.20180604.001

摘要

[目的]克隆、表达克雷伯氏菌Klebsiella sp.GXK-1 菌株中的α-L-鼠李糖苷酶基因,并研究重组酶的酶学性质.[方法]比对分析 GenBank数据库中克雷伯氏菌同属的α-L-鼠李糖苷酶基因序列,设计简并引物 PCR扩增基因的保守区.扩增目的基因,以 pSE380 为表达载体构建重组质粒 pSE-rha1,并在大肠杆菌E.coli XL-blue进行诱导表达,使用镍亲和层析纯化重组蛋白,研究目的蛋白 RHA1 的酶学性质.[结果]以pNPR 为底物,进行重组酶酶学性质的研究.重组酶 RHA1 的最适 pH 值和最适温度分别为 5.0 和 45℃,Km值为(0.223± 0.030)mmol/L,Vmax值为(1.272±0.121)μmol/(min·mg).在 pH 值为 6～10 的缓冲液内酶活力仍保持在80％以上;在温度为40℃以下时,酶活较为稳定,但在温度高于40℃时酶活力迅速下降.RHA1 能水解pNPR、橙皮苷和芦丁.[结论]RHA1 具有良好的 pH 稳定性,不仅能够水解人工底物pNPR,还能够水解α-1,6 键的天然底物橙皮苷和芦丁,具有一定的医疗应用价值.