利用RNAi研究棉花SSH文库上调表达EST的功能

• 作者: 尹国 张朝军 李世云 李付广 路正营 韩永亮
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: RNAi SSH EST 愈伤组织
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 页码范围: 71-79
• 页数: 9页
• 分类号: Q78|S562.03
• 字数: 5856字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2018.01.012

摘要

为了进一步研究棉花体细胞胚胎发生的分子机制,采用RNAi技术,利用棉花生物学国家重点实验室在表达载体pBI121的基础上成功改造的双元表达载体pCRI1210,构建了针对棉花胚性愈伤组织抑制性消减文库中上调表达的4个ESTs干涉载体pCRI210-EST(EST-418、EST-447、EST-496和EST-653).以从中棉所24中筛选出的体细胞胚胎分化率较高的株系W10的无菌苗下胚轴切段为受体,利用农杆菌介导法转化pCRI1210-EST干涉载体,浸染后的下胚轴切段在愈伤组织诱导培养基上进行分化.利用半定量RT-PCR技术检测愈伤组织的cDNA.结果表明,转化4个ESTs干涉载体后的胚性愈伤组织中均检测到了载体骨架,证明干涉载体均成功整合进了基因组DNA中,而4个ESTs对应的cDNA的表达量均出现不同程度的下调,不同干涉载体转化的下胚轴出愈率呈现上升和下降2种结果.其中转化EST-418干涉载体的下胚轴出愈率与对照相比有所提高,转化EST-447、EST-496和EST-653干涉载体的下胚轴出愈率与对照相比出现不同程度的下降.因此推断,4个ESTs在愈伤组织分化过程中发挥着不同的作用.其中,EST-418在棉花体细胞胚胎发生过程中起抑制作用,而EST-447、EST-496和EST-653国外品种中在棉花体细胞胚胎发生过程中起促进作用,其结果为分离棉花体细胞胚胎发生相关基因提供了技术和理论支撑.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李付广	中国农业科学院棉花研究所	38	759	17.0	27.0
2	张朝军	中国农业科学院棉花研究所	17	277	11.0	16.0
3	李世云		26	110	6.0	9.0
4	韩永亮		26	113	6.0	9.0
5	路正营		29	85	5.0	7.0
6	尹国		24	68	5.0	7.0