布鲁氏菌ManB蛋白的生物信息学分析及免疫原性研究

• 作者: 徐锦凤 易德武 王月丽 王震 童志霞 许志平 陈创夫
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 布鲁氏菌 磷酸甘露糖变位酶(manB) 生物信息学 免疫原性
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 311-318
• 页数: 8页
• 分类号: S855.1+1|Q71
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2018.02.014

摘要

布鲁氏菌(Brucella)是一种革兰氏阴性兼胞内寄生菌,是多种动物和人布氏杆菌病的病原.布鲁氏菌磷酸甘露糖变位酶(phosphomannomutase,manB)基因编码磷酸甘露糖变位酶,是布鲁氏菌毒力因子脂多糖的重要组成成分.为了研究布鲁氏菌毒力因子脂多糖的ManB蛋白的生物学功能和免疫原性,本文构建磷酸甘露糖变位酶manb基因原核表达载体,对ManB蛋白进行生物信息学预测分析并鉴定其免疫原性.采用PCR技术对布鲁氏菌manB基因进行特异性扩增,与pET-28a表达载体连接后转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Westem blot检测目的蛋白的表达及其反应原性,并通过小鼠(Mus musculus)免疫实验评价其免疫原性.生物信息学分析显示,该蛋白无跨膜区结构,不存在信号肽,二级结构以o-螺旋为主.利用Phyre2服务器成功构建了该蛋白的三维模型.SDS-PAGE和Western blot结果表明获得了约56.3 kD的融合蛋白,且该融合蛋白与羊抗布鲁氏菌阳性血清可发生特异性反应.间接酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)结果显示,免疫小鼠7、14、21d,实验组小鼠均可产生抗体,且随时间增加抗体水平也随之升高,并在免疫21d后达到最高峰.ManB重组蛋白免疫小鼠后可诱导产生高水平的特异性抗体,具有良好的免疫原性.本研究结果为今后开发布鲁氏菌新型疫苗提供了新材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈创夫	新疆石河子大学生命科学学院	24	169	8.0	12.0
2	王震	新疆石河子大学动物科技学院	4	4	1.0	2.0
3	徐锦凤	新疆石河子大学生命科学学院	2	4	1.0	2.0
4	易德武	新疆石河子大学动物科技学院	2	4	1.0	2.0
5	童志霞	新疆石河子大学动物科技学院	1	4	1.0	1.0
6	王月丽	新疆石河子大学动物科技学院	1	4	1.0	1.0
7	许志平	新疆石河子大学动物科技学院	1	4	1.0	1.0