小鼠肠神经前体细胞培养、转染和功能研究

• 作者: 唐维兵 朱中贤 李红星 杜春霞 谢华
• 来源期刊: 中华小儿外科杂志
• 关键词: 先天性巨结肠 肠神经系统 转染
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 64-70
• 页数: 7页
• 字数: 6212字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2018.01.014

摘要

目的 建立小鼠肠神经前体细胞体外培养和纯化的方法,寻找合适的肠神经前体细胞转染方式进行增殖分化等功能实验,为研究肠神经系统发育及疾病奠定基础.方法 取胎龄16.5d(E16.5)的ICR小鼠胚胎肠道,经胶原酶消化后制成单细胞悬液,接种到神经前体细胞培养基中,多次换液后进行免疫学鉴定.纯度达到95％的神经前体细胞使用lipo2000,RNAimax,慢病毒等三种方式进行mmu-miR-346转染,通过实时荧光定量PCR检测神经前体细胞内mmu-miR-346的表达来比较这三种方式的转染效率.使用EdU法检测肠神经前体细胞的增殖情况,通过分化培养基诱导检测肠神经前体细胞的分化情况.结果 培养第2天出现神经球,经过4次全换液,免疫学鉴定显示(96.85±0.5357)％细胞为Nestin/p75双阳性.lipo2000,RNAimax,慢病毒这三种转染方式中仅慢病毒方法的转染效率最高,能显著提升mmu-miR-346表达水平(差异倍数:117.45).EdU阳性率与TuJ1阳性率分别从阴性对照组的(17.87±1.13)％和(24.87±0.6)％降至转染组的(6.73±0.43)％与(11.90± 0.85)％,两组在增殖与分化中的差异均具有统计学意义(P＜0.0001;P＜0.001).结论 通过分离消化E16.5小鼠肠道可以建立小鼠肠神经前体细胞培养和纯化的方法,慢病毒方法在肠神经前体细胞的转染效率最高,能成功进行增殖与分化实验,可以为肠神经系统发育和疾病的研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐维兵	南京医科大学附属儿童医院外科	55	157	7.0	10.0
2	谢华	南京医科大学附属儿童医院外科	6	5	2.0	2.0
3	李红星	南京医科大学附属儿童医院外科	3	0	0.0	0.0
4	朱中贤	南京医科大学附属儿童医院外科	1	0	0.0	0.0
5	杜春霞	南京医科大学附属儿童医院外科	1	0	0.0	0.0