耐盐转基因大豆事件FA8015旁侧序列分离及定性PCR检测

• 作者: 仲晓芳 杨向东 牛陆 赵倩倩 马阔
• 来源期刊: 大豆科学
• 关键词: 大豆 耐盐 转基因事件 重测序 旁侧序列 定性PCR检测 耐盐
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 遗传育种·分子生物学
• 页码范围: 854-859
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11861/j.issn.1000-9841.2018.06.0854

摘要

本研究前期利用转基因技术,将菠菜(Atriplex hortensis)甜菜碱醛脱氢酶编码基因AhBADH导入栽培大豆Williams 82中,获得耐盐性较强的转基因大豆事件FA8015.为进一步加快该转基因事件生物安全评价,本研究分离了FA8015外源T-DNA旁侧序列,并依据其序列特征,建立事件特异性检测方法.Southern杂交结果表明,转基因事件FA8015外源T-DNA为单拷贝插入.利用基因组重测序技术,获得转基因大豆事件FA8015的基因组信息,并与参考基因组Williams 82做比较,初步确定转基因大豆事件FA8015外源T-DNA片段整合位点.然后根据整合位点,设计融合大豆基因组和T-DNA序列的引物,获得了1 160bp的左边界旁侧序列,包括405 bp的大豆基因组序列和750 bp的T-DNA序列;右边界获得了1 254 bp的旁侧序列,其中601 bp为T-DNA片段,653 bp为大豆基因组序列;序列分析证明转基因事件FA8015的T-DNA整合位点为Chr15染色体的25129882位点,整合方式为正向单拷贝插入,与Southern杂交和重测序结果一致.依据PCR结果设计事件特异性引物,建立了转基因大豆事件FA8015转化体特异性检测方法.该方法特异性强、灵敏度高,可快速识别该转基因大豆事件的身份,为该转化事件及其衍生品的安全性和监管提供技术支撑.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨向东	吉林省农业科学院农业生物技术研究所	27	158	8.0	12.0