RNA干扰猪NHEJ通路修复因子对HR效率的影响

• 作者: 全绒 刘德武 吴珍芳 张献伟 李国玲 李紫聪 莫健新 蔡更元 郑恩琴 钟翠丽 顾婷
• 来源期刊: 遗传
• 关键词: 同源重组 RNA干扰 非同源末端连接 PNKP NHEJ1 LIG4
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 749-757
• 页数: 9页
• 字数: 4862字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16288/j.yczz.18-016

摘要

非同源末端连接(nonhomologous end joining,NHEJ)是动物基因组DNA双链断裂(double-strand break,DSB)修复的优选途径,通过与同源重组(homologous recombination,HR)竞争DSB靶点,进而抑制HR的效率.为提高HR效率,本研究针对猪NHEJ通路修复关键因子PNKP、LIG4和NHEJ1的编码序列,设计并合成相应的靶向小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),组成若干对RNAi(RNA interference)系统,将RNAi系统与报告质粒SSA-GFP reporter、HDR-GFP system和ssODN-GFP system共转染至猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts,PFFs),检测敲低上述NHEJ关键修复因子后对HR的影响.RNAi结果显示,针对PNKP、LIG4和NHEJ1设计的siRNA均可显著敲低PNKP、LIG4和NHEJ1基因的表达(P<0.05).选择干扰效果最好的siRNA与报告载体共转染PFFs,结果表明干扰PNKP基因表达后可显著提高单链退火(single strand annealing,SSA)修复效率、双链或单链DNA介导的同源重组定向修复(homology-directed repair,HDR)效率分别为55.7％、37.4％和73.1％(P<0.05),而干扰LIG4和NHEJ1分别提高双链和单链介导的HDR效率为37.5％ 和76.9％(P<0.05).