GlnA基因对刺糖多孢菌生长发育及多杀菌素合成的影响

• 作者: 丁学知 何昊城 刘朱东 刘熊 夏立秋 彭胜男 穰杰 肖洁
• 来源期刊: 中国生物防治学报
• 学科: 农学
• 关键词: 刺糖多孢菌 多杀菌素 谷氨酰胺合成酶 阻断 过量表达
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 625-638
• 页数: 14页
• 分类号: S476
• 语种: 中文
• DOI: 10.16409/j.cnki.2095-039x.2018.04.018

摘要

谷氨酰胺合成酶(GS,glutamine synthetase)是由GlnA基因编码的生物体中最古老也是最广泛存在的酶,它参与许多生物体中的氮和碳代谢,是生物体氮代谢的关键酶之一,对微生物的生命活动起着重要作用.本文研究了GlnA基因对刺糖多孢菌Saccharopolyspora spinosa的生长发育及次级代谢产物合成的影响,从刺糖多孢菌基因组中克隆了glnA基因的部分片段,将其与穿梭载体pOJ260连接,构建敲除载体pOJ260-glnA,通过接合转移将其导入刺糖多孢菌野生菌中,获得刺糖多孢菌敲除菌株S.spinosa-△glnA;同时,利用重叠延伸PCR将glnA基因置于红霉素强启动子PermE下,并将融合片段PermE-glnA与穿梭载体pOJ260进行酶切酶连,构建过量表达载体pOJ260-PermE-glnA,通过接合转移将其导入刺糖多孢茵中,获得了刺糖多孢菌过量表达菌株S.spinosa-glnA.表型分析发现,glnA基因的敲除对刺糖多孢菌的菌丝形态、孢子萌发等方面都有显著的抑制作用.HPLC检测分析发现,过量表达菌株中多杀菌素产量相比原始菌株提高到170％;该研究表明glnA基因对刺糖多孢菌的生长发育与多杀菌素的合成有一定的影响,为研究其在链霉菌次级代谢过程中的作用奠定了重要基础.