原子力显微镜力谱研究大肠杆菌启动子与RNA聚合酶的相互作用

• 作者: 史劲松 姚智绚 张晓娟 张晓梅 段艳婷 许正宏
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 作用力 大肠杆菌启动子 RNA聚合酶 AFM CAT酶活
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 109-121
• 页数: 13页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20170046

摘要

[目的]本研究通过原子力显微镜(AFM)力谱技术研究了大肠杆菌启动子与RNA聚合酶(RNAp)间的相互作用,目的是建立一种高效的体外表征启动子的新方法.[方法]优化了用于单分子AFM力谱分析的蛋白固定化策略,建立AFM力谱分析启动子的策略,以缺失识别启动子序列的σ亚基核心RNA聚合酶(RNAp-C)为对照,研究启动子/RNAp间相互作用的特异性.最后比较了序列较典型的Ls1启动子和缺失-10区的Ls2启动子的力谱.[结果]基于建立的方法,验证了Ls1与大肠杆菌RNAp结合的特异性,其相互作用力为(331.10±5.10) pN.与Ls1相比,Ls2启动子与RNAp结合显著减少.利用启动子探针质粒,以报告基因cat的表达产物氯霉素乙酰转移酶(CAT)的酶活验证Ls1、Ls2启动子强度,分别为(181.70±4.10)、(0.30±0.20) U/mg.[结论]本研究建立的基于AFM力谱技术的启动子分析技术,是一种高效的、直接定量表征启动子活性的新方法.