草鱼核因子E2相关因子2基因克隆分析及其 对呼吸爆发的调控作用

• 作者: 代云佳 兰江风 冯燕 刘小玲 周洋 张玉蕾 林蠡 秦真东 赵丽娟
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 草鱼 核因子E2相关因子2(Nrf2) 基因克隆 多克隆抗体制备 呼吸爆发
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 页码范围: 161-177
• 页数: 17页
• 分类号: Q785|S917.4
• 字数: 10825字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20161210650

摘要

呼吸爆发过程可以产生大量的活性氧,核因子E2相关因子2(Nrf2)在此过程中起着重要作用.实验克隆和分析了草鱼的Nrf2基因,随后制备了Nrf2蛋白的多克隆抗体,研究了其和呼吸爆发的关系.草鱼Nrf2基因cDNA长度为1994 bp,开放阅读框为1782 bp,编码593个氨基酸(aa).氨基酸序列比对发现,草鱼Nrf2基因与鲤的同源性最高,为87％;草鱼Nrf2基因含有6个进化过程中保守的Neh[Nrf2-Epoxy chloropropane(ECH)hom-ology]区.实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测结果表明,Nrf2基因在检测的草鱼8个组织中均有表达.Nrf2激活剂叔丁基对苯二酚(tBHQ)处理草鱼肾细胞(CIK)后,CIK细胞总抗氧化能力显著上调,产生的活性氧下调,Nrf2及其下游的HO-1和GST基因的mRNA表达上调.Western blot和免疫荧光(IF)检测结果表明,tBHQ处理CIK后,Nrf2的蛋白表达也上调,并伴随着入细胞核现象.研究表明,保守的草鱼Nrf2基因在机体中广泛表达,能通过上调自身及其下游抗氧化基因的表达下调细胞活性氧的产生,从而参与调控呼吸爆发过程.