鞘糖脂内切糖苷酶的半理性设计

• 作者: 冯雁 李卓 杨广宇 郝俊尧 马富强
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 鞘糖脂内切糖苷酶Ⅱ 半理性设计 分子改造 催化机制
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 255-261
• 页数: 7页
• 分类号: Q556.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2018.03.0044

摘要

[目的]对鞘糖脂内切糖苷酶EGCaseⅡ进行半理性设计,获得高水解活性突变体.[方法]用半理性设计方法进行突变库设计,利用HPLC对突变库进行筛选,随后对阳性突变体进行动力学及底物谱表征,并利用结构建模对活性提高的分子机制进行解析.[结果]获得了对鞘糖脂GM1、GM3水解活性提高的突变体S63 G/D311E、I276L/D311V,活性分别提高为野生型的25.3倍、11.8倍.酶动力学表征显示,S63G/D311E的KM由0.17 mmol/L降低到0.06 mmol/L,kcat由5.5 min-1增大到50.3 min-1.酶-底物复合物模式结构分析表明,D311E、D311V、I276L这几种突变更有利于酶与底物结合,从而提高酶活性.[结论]通过半理性设计成功获得对GM1和GM3水解活性分别提高25.3倍和11.8倍的EGCaseⅡ突变体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨广宇		9	9	2.0	2.0
2	冯雁		15	10	2.0	2.0
3	李卓		2	1	1.0	1.0
4	马富强		3	2	1.0	1.0
5	郝俊尧		1	0	0.0	0.0