重组大肠杆菌转化甘油合成聚3-羟基丙酸-co-乳酸

• 作者: Lacmata Tamekou Stephen 冯新军 刘修涛 咸漠 赵广 赵志强
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 其他
• 关键词: 聚3-羟基丙酸-co-乳酸 聚羟基脂肪酸合成酶 丙酰辅酶A转移酶 位点突变 甘油
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 46-53
• 页数: 8页
• 分类号: O819
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20180207

摘要

聚羟基脂肪酸酯作为性质优良的生物塑料,引起了广泛的关注.由于聚羟基脂肪酸合成酶PhaC特异性较强,难以通过生物合成方法获得含乳酸单体聚合物.为了实现乳酸的聚合,PhaC的筛选至关重要.以甘油为底物,通过引入Klebsiella pneumoniae的甘油脱水酶DhaB123及其激活因子GdrAB以及Salmonella typhimurium LT2的丙醛脱氢酶基因PduP,获得3-羟基丙酰辅酶A;通过引入Megasphaera elsdenii DSM 20460的丙酰辅酶A转移酶PCT,获得乳酰辅酶A;并对3种不同聚羟基脂肪酸合成酶的作用进行考察.在Pseudomonas putida的原始酶PhaC1或者PhaC2的作用下,不能实现乳酸的聚合;而在双位点突变(Ser325 Thr和Gln481 Lys)的PhaC1(STQK)存在条件下,重组菌可以利用甘油合成聚3-羟基丙酸-co-乳酸.经过对溶氧、有机氮源等发酵条件的优化,聚3-羟基丙酸-co-乳酸的产量可以达到0.22g/L,占细胞干重的3.2％,是含乳酸单体聚合物生物合成研究的一次有益尝试.