抑制S1PR2蛋白表达对卵巢上皮性癌SKOV3细胞增殖能力的影响

• 作者: 刘艺璇 戴岚 狄文 谢蕾
• 来源期刊: 中华妇产科杂志
• 关键词: 卵巢肿瘤 受体,鞘磷脂 细胞系,肿瘤 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 106-110
• 页数: 5页
• 字数: 4425字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-567x.2018.02.007

摘要

目的 探讨抑制1-磷酸鞘氨醇受体2(S1PR2)对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞增殖能力的影响及其作用机制.方法(1)设计针对S1PR2基因的小分子干扰RNA(siRNA,命名为si-S1PR2),以及与S1PR2基因无关的siRNA(作为阴性对照);以卵巢癌细胞系SKOV3细胞作为研究对象,实验分为3组,分别为si-S1PR2转染组、阴性对照组和空白对照组,采用蛋白印迹(western blot)法检测3组SKOV3细胞中S1PR2蛋白的表达.(2)体外实验:分组同前,采用活细胞计数(CCK-8)法检测转染后不同时间点(分别为24、48、72 h)3组SKOV3细胞增殖的抑制率;流式细胞仪检测转染后3组SKOV3细胞的细胞周期比例;western blot法检测转染后3组SKOV3细胞中磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达水平.(3)体内实验:将SKOV3细胞接种于裸鼠腹腔,构建卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤模型.实验分为两组,分别为S1PR2抑制剂组和对照组(每组8只裸鼠),两组裸鼠在腹腔接种SKOV3细胞后7 d开始腹腔给药,分别给予S1PR2抑制剂——JTE-013和磷酸盐缓冲液(PBS),每周2次共8次.28 d后处死并解剖两组裸鼠,观察腹腔移植瘤的生长情况.结果(1)western blot法检测显示,si-S1PR2转染组SKOV3细胞中S1PR2蛋白的表达水平为0.24±0.04,与阴性对照组(1.07± 0.13)、空白对照组(1.10±0.14)分别比较,差异均有统计学意义(P均<0.01).(2)CCK-8法检测显示,转染24、48、72 h后,si-S1PR2转染组SKOV3细胞增殖的抑制率[分别为(26.6±3.3)%、(35.0±3.4)%、(34.0±2.8)%]明显高于阴性对照组[分别为(1.7±0.9)%、(2.5±0.5)%、(2.4±1.1)%;P均<0.01]及空白对照组(均为0;P均<0.01).流式细胞仪检测显示,转染48 h后,si-S1PR2转染组细胞的G0/G1期比例为(70.9±2.8)%,明显高于空白对照组及阴性对照组[分别为(61.7±2.4)%、(62.1±3.3)%;P均<0.01].western blot法检测显示,转染48 h后,si-S1PR2转染组细胞中p-ERK1/2蛋白的表达水平为0.11±0.03,明显低于阴性对照组和空白对照组(分别为0.68±0.09、0.62±0.09;P均<0.01).(3)28 d后处死并解剖裸鼠,S1PR2抑制剂组、对照组裸鼠腹腔内的移植瘤数分别为(8.2±3.7)、(15.4±4.3)个,移植瘤质量分别为(0.21±0.07)、(0.45±0.12)g,两组分别比较,差异均有统计学意义(P均<0.01).结论 在体内、外抑制S1PR2蛋白表达后均能降低卵巢癌SKOV3细胞的增殖能力,其机制之一可能是通过下调细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)通路的磷酸化水平,阻止卵巢癌细胞从G1期到S期的转化.