Src激酶抑制剂CGP77675对TGF-β1诱导的视网膜色素上皮细胞上皮-间质转化的抑制作用

• 作者: 何建锋 吕立夏 徐国彤 李宗义 沈俊慧 罗俊杰 高芙蓉
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 上皮-间质转化 视网膜色素上皮细胞 Src激酶抑制剂 增生性玻璃体视网膜病变
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 5-11
• 页数: 7页
• 字数: 5977字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2018.01.002

摘要

目的 探讨Src激酶抑制剂CGP77675 (CGP)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞上皮-间质转化(EMT)过程的作用及其机制.方法 将培养的人RPE细胞株(ARPE19)分为对照组、TGF-β1处理组和TGF-β1 +CGP处理组,并根据分组用相应药物处理细胞.细胞体外培养后3d于光学显微镜下观察各组细胞的形态变化;分别采用实时荧光定量PCR法、Western blot法和免疫荧光染色法检测各组细胞中EMT相关基因及其蛋白的表达变化,包括细胞中纤溶酶原激活物抑制蛋白-1(PAI1)和纤连蛋白-1(FN1)的相对表达量及上皮细胞中闭锁小带蛋白1(ZO1)和细胞骨架蛋白F-肌动蛋白(F-actin)的分布;采用MTT法检测各组细胞的增生率;采用划痕试验检测各组细胞的迁移能力. 结果 对照组ARPE19细胞呈上皮样形态,F-actin和ZO1沿细胞膜表达;TGF-β1处理组细胞为纤维样,F-actin表达的排列紊乱,细胞膜上ZO1表达不连续.TGF-β1+CGP处理组细胞维持上皮样形态,F-actin和ZO1表达清晰且完整.对照组、TGF-β1处理组和TGF-β1+CGP处理组细胞中FN1 mRNA和PAI1 mRNA相对表达量总体比较差异均有统计学意义(F=33.14、82.92,均P＜0.01),对照组细胞中FN1 mRNA和PAI1 mRNA相对表达量为0.211±0.080和0.116±0.073,TGF-β1+ CGP处理组细胞中FN1 mRNA和PAI1 mRNA相对表达量分别为0.368±0.097和0.362±0.048,均明显低于TGF-β1处理组的1.000±0.001和1.000±0.001,差异均有统计学意义(均P＜0.05).3个组细胞中FN1和PAI1蛋白相对表达量总体比较差异均有统计学意义(F=181.90、48.85,均P＜0.01),对照组细胞中FN1和PAI1蛋白相对表达量分别为0.166±0.055和0.327±0.066,TGF-β1+CGP处理组FN1和PAI1蛋白相对表达量分别为0.143±0.030和0.260±0.077,均明显低于TGF-β1处理组的1.000±0.001和1.000±0.001,差异均有统计学意义(均P＜0.05).细胞处理后3d,TGF-β1 +CGP处理组细胞增生率为(79.30±3.44)％,与对照组的(99.50±1.00)％和TGF-β1处理组的(95.10±4.20)％比较均明显下降,差异均有统计学意义(均P＜0.01);处理后7d,TGF-β1+CGP处理组细胞增生率为(54.80±7.39)％,明显低于TGF-β1处理组的(92.10±4.50)％和对照组的(99.10±0.50)％,差异均有统计学意义(均P=0.004).细胞划痕试验显示,TGF-β1处理组细胞迁移能力明显增强,TGF-β1+CGP处理组划痕宽度无明显变化. 结论 Src激酶抑制剂CGP能够抑制由TGF-β1诱导的ARPE19细胞EMT,提示Src信号通路与EMT过程有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕立夏	同济大学医学院再生医学系	86	277	9.0	13.0
2	何建锋	同济大学眼科研究所临床视觉科学实验室	4	16	1.0	4.0
3	徐国彤	同济大学医学院再生医学系	34	109	5.0	9.0
4	李宗义	同济大学眼科研究所临床视觉科学实验室	5	18	3.0	4.0
5	高芙蓉	同济大学医学院再生医学系	5	17	2.0	4.0
6	罗俊杰	同济大学眼科研究所临床视觉科学实验室	2	4	1.0	2.0
7	沈俊慧	同济大学附属第十人民医院眼科	2	9	1.0	2.0