摘要:
目的 观察缺氧条件下自噬对视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)表达碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及转化生长因子β2(transforming growth factor,TGF-β2)的调控作用. 方法 将体外培养生长良好的ARPE-19细胞随机分为4组:对照组(常氧条件下培养),缺氧组(在1%O2/5% CO2/94%N2缺氧箱中培养24h),缺氧+ 3-MA组(加入10 mmol/L自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤,3-MA)及缺氧+CQ组(加入50 μmol/L自噬抑制剂氯喹,CQ),后三组均在缺氧箱中培养24h.采用Western blot法检测细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(microtubule associ-ated protein 1 light chain 3 B,LC3B)、Beclin-1及p62的表达,ELISA法检测细胞上清液中bFGF及TGF-β2的浓度. 结果 正常对照组、缺氧组、缺氧+ 3-MA组和缺氧+CQ组细胞中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值分别为0.24±0.02,0.50±0.05,0.34±0.01和0.67 ±0.05;Beclin-1相对表达量分别为0.32±0.040,0.97±0.05,0.78±0.06和0.54 ±0.01;p62相对表达量分别为1.03±0.02,0.32 ±0.10,0.78±0.08和0.96±0.02;bFGF的浓度(pg/ml)分别为1771.01±110.38,3 709.79±262.68,3 026.24±230.39和2 610.01±183.52;TGF-β2的浓度(pg/ml)分别为256.11±27.63,516.85±57.94,439.45±17.53和353.58±33.12.与正常对照组相比,缺氧组细胞的LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值、Beclin-1的蛋白表达明显增加,p62明显下降(P<0.05),bFGF及TGF-β2水平升高(P<0.05).与缺氧组相比,缺氧+3-MA组或缺氧+CQ组抑制自噬能明显减少或增加LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ的表达,减少Beclin-1的表达,增加p62的表达,同时减少bFGF及TGF-β2的表达. 结论 缺氧导致RPE细胞自噬激活,进一步调控RPE细胞bFGF及TGF-β2的表达.