M13-IN5重组噬菌体的构建与鉴定及其对沙眼衣原体的作用研究

• 作者: 任杰 刘全忠 刘原君 王生 练婷婷 邵丽丽 郭媛丽 郭睿 魏世娟
• 来源期刊: 中华皮肤科杂志
• 关键词: 沙眼衣原体 细菌噬菌体M13 DNA,重组 包涵体 IN5环
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 859-864
• 页数: 6页
• 字数: 5242字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2018.12.002

摘要

目的 构建针对沙眼衣原体的活性噬菌体,并评估其对沙眼衣原体的作用.方法 将衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白VP1的IN5序列与M13噬菌体重组,获得重组M13-IN5噬菌体.利用PCR扩增、酶切、测序重组噬菌体基因,验证目的片段是否成功插入;通过噬菌斑形成实验检测重组噬菌体的活性.利用CCK8法检测效价为1011噬斑形成单位(PFU)/ml的M13噬菌体和M13-IN5重组噬菌体对Hela细胞增殖的影响,同时设置空白对照组(未感染衣原体的Hela细胞).Western印迹检测重组噬菌体、M13噬菌体、对数期大肠杆菌ER2738中IN5环蛋白的表达.在沙眼衣原体E型标准株的培养过程中,分别加入效价为1011PFU/ml的M13噬菌体、M13-IN5重组噬菌体进行干预,并设置衣原体对照组.感染后36 h,共聚焦显微镜下观察M13噬菌体和M13-IN5重组噬菌体定位情况;在感染后36、48、60、72 h碘染色观察计数包涵体.两样本均数间比较用t检验;多组样本均数间比较采用方差分析,两两比较采用Bonferroni检验.结果 成功构建含有IN5环基因的具有生物活性的重组M13噬菌体,Western印迹证实重组噬菌体表达IN5环/pⅢ融合蛋白,重组噬菌体效价达3.05×1011 PFU/ml.CCK8法检测显示,空白对照组、M13噬菌体组、M13-IN5噬菌体组A450值分别为3.63±0.01、3.55±0.02、3.70±0.01,组间差异无统计学意义(F=12.0,P＞0.05).共聚焦显微镜定位显示,噬菌体荧光与衣原体包涵体荧光存在重叠;衣原体感染后36、72h,M13-IN5噬菌体组和M13噬菌体组包涵体数目较对照组减少(均P＜ 0.05),且M13-IN5噬菌体组包涵体数目较M13噬菌体组有明显降低(P＜0.05);衣原体感染后48、60h,M13噬菌体组、M13-IN5噬菌体组与对照组包涵体数目差异无统计学意义(P＞0.05).结论 构建的M13-IN5重组噬菌体具有生物学活性,且能够成功表达IN5环蛋白;体外实验中,该噬菌体能进入衣原体包涵体内,且能明显抑制沙眼衣原体感染.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘原君	天津医科大学总医院皮肤性病科	65	208	7.0	9.0
2	刘全忠	天津医科大学总医院皮肤性病科	170	703	11.0	17.0
3	任杰	天津医科大学总医院皮肤性病科	17	66	6.0	6.0
4	练婷婷	天津医科大学总医院皮肤性病科	2	1	1.0	1.0
5	魏世娟	天津医科大学总医院皮肤性病科	2	1	1.0	1.0
6	郭媛丽	天津医科大学总医院皮肤性病科	6	16	2.0	4.0
7	郭睿	天津医科大学总医院皮肤性病科	5	14	2.0	3.0
8	王生	天津医科大学总医院皮肤性病科	2	12	1.0	2.0