稳定表达GRIK3乳腺癌MDA-MB-231细胞株的筛选及鉴定

• 作者: 吴伊雪 孙朝晖 李林海 肖斌 陈丽丹 黄晓燕
• 来源期刊: 临床肿瘤学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乳腺癌 GRIK3 MDA-MB-231细胞株 稳定表达
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 973-977
• 页数: 5页
• 分类号: R737.9
• 字数: 4127字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0460.2018.11.003

摘要

目的 构建稳定表达GRIK3的乳腺癌细胞株MDA-MB-231,为研究GRIK3在乳腺癌中的生物学功能奠定基础.方法 以非病毒质粒3×Flag-GRIK3为模板,PCR扩增目的基因,将目的基因与慢病毒载体表达质粒重组连接,重组质粒、包装质粒psPAX2以及包膜质粒pMD2.G共转染293T包装细胞,将获得的重组慢病毒感染乳腺癌MDA-MB-231细胞株,连续使用嘌呤霉素7天筛选稳定转染的细胞株.在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白GFP的表达情况以鉴定稳定表达目的基因细胞株,采用QPCR和Western blotting分别检测稳定表达细胞株及空载体对照细胞中GRIK3的表达.结果 PCR成功扩增出目的基因,扩增后产物与慢病毒载体成功连接,连接后的重组慢病毒载体经DNA测序鉴定插入基因序列正确.重组慢病毒质粒、包装质粒psPAX2以及包膜质粒Pmd2.G成功转染293T细胞,收集的慢病毒能够成功转染MDA-MB-231细胞,并且在显微镜下能够观察到稳定表达GRIK3 MDA-MB-231细胞中明亮的绿色荧光.QPCR结果显示,GRIK3 mRNA在重组MDA-MB-231细胞中的表达水平为5.443±0.459,显著高于对照组的1.0±0.152,差异有统计学意义(P＜0.01).Western blotting结果显示,GRIK3蛋白在重组MDA-MB-231细胞中的表达水平为2.502±0.092,高于对照组的0.653±0.032,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 成功构建了重组GRIK3慢病毒载体,并筛选出稳定表达GRIK3蛋白的MDA-MB-231细胞株,为进一步探索GRIK3在乳腺癌发生、发展中的机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴伊雪	广州南部战区总医院检验科	1	0	0.0	0.0
2	肖斌	广州南部战区总医院检验科	1	0	0.0	0.0
3	孙朝晖	广州南部战区总医院检验科	1	0	0.0	0.0
4	陈丽丹	广州南部战区总医院检验科	1	0	0.0	0.0
5	黄晓燕	广州南部战区总医院检验科	1	0	0.0	0.0
6	李林海	广州南部战区总医院检验科	1	0	0.0	0.0