重组钙网蛋白原核表达条件优化及蛋白纯化

• 作者: 王朋 秦松 覃艳艳 邹黎黎
• 来源期刊: 巴楚医学
• 学科: 医学
• 关键词: 钙网蛋白 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 11-15
• 页数: 5页
• 分类号: R393
• 字数: 3420字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2096-6113.2018.01.005

摘要

目的:构建重组钙网蛋白(CRT)原核表达质粒并优化其在大肠杆菌中表达的条件.方法:采用RT-PCR从总RNAs中克隆小鼠CRT的cDNA并构建原核表达重组质粒(pET15b-CRT).将构建成功的质粒转化到大肠杆菌BL21 (DE3)中,检测在不同温度,不同诱导时间及不同浓度异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)条件下重组CRT的表达水平.结果:成功构建重组CRT原核表达载体;诱导重组CRT的最佳条件是不加IPTG在30℃培养20 h,此条件下重组蛋白表达水平比加入IPTG诱导高大约6.29倍;经过镍柱纯化后的CRT重组蛋白具有良好的抗原性,可被特异性抗体识别.结论:成功在大肠杆菌内表达重组CRT并明确了其最佳的表达条件,这种方法的建立为后续CRT功能研究奠定了一定的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邹黎黎	三峡大学感染与炎症损伤研究所	16	32	3.0	5.0
5	王朋	三峡大学感染与炎症损伤研究所	3	0	0.0	0.0
9	秦松	三峡大学感染与炎症损伤研究所	3	13	1.0	3.0
13	覃艳艳	三峡大学感染与炎症损伤研究所	2	1	1.0	1.0