桑螟胞外铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆与融合表达及重组蛋白酶活性检测

• 作者: 刘云财 徐豫松 徐雅岚 王华兵 王沛城 苏航 魏天铖
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 桑螟 高温胁迫 胞外铜锌超氧化物歧化酶 基因克隆 融合表达 酶活力
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 188-195
• 页数: 8页
• 分类号: S888.72+2|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13441/j.cnki.cykx.2018.02.002

摘要

桑螟(Glyphodes pyloalis)是蚕区桑园的主要害虫之一,鉴定其抵御各种环境胁迫相关的基因,是制定防治新策略的重要理论依据.对桑螟幼虫转录组数据的分析中,发现桑螟胞外铜锌超氧化物歧化酶(ecCu/ZnSOD)基因在应对高温胁迫时的表达量发生显著变化.为了明确ecCu/ZnSOD在桑螟应对不良环境中发挥的作用,克隆和鉴定了其编码基因GpecCu/ ZnSOD(GenBank登录号:MG566057).GpecCu/ ZnSOD基因的开放阅读框长726 bp,编码241个氨基酸,编码蛋白质序列与脐橙螟(Amyelois transitella)的一种SOD蛋白基因(GenBank登录号:XP_013197347.1)编码氨基酸序列的一致性高达83％.采用邻近相接法构建桑螟与其他昆虫的Cu/ZnSOD系统发生树,结果显示Cu/ZnSOD被分为ecCu/ZnSOD和icCu/ZnSOD两类,主要是随物种进化而进化.采用半定量RT-PCR检测不同温度处理桑螟5龄幼虫的GpecCu/ ZnSOD基因表达情况,结果显示幼虫体内的GpecCu/ZnSOD在高温(40℃)和低温(4℃)条件下表达量最高.构建pCold-GpecCu/ZnSOD重组表达质粒,并在大肠埃希菌中实现异源表达.利用镍柱亲和层析法分离纯化重组GpecCu/ZnSOD蛋白,采用WST-1法测定重组GpecCu/ZnSOD蛋白在40℃时的酶活性最高,并且经60～70℃处理后仍然具有较高的酶活性.采用牛津杯法分析重组GpecCu/ZnSOD的抗氧化活性表明:过表达GpecCu/ZnSOD的大肠埃希菌抗氧化的能力显著增强,显示GpecCu/ZnSOD具有较强的抗氧化功能.研究结果暗示GpecCu/ZnSOD在桑螟应对高温胁迫过程中发挥着重要作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐豫松		11	177	6.0	11.0
2	王华兵		7	50	3.0	7.0
3	刘云财		3	2	1.0	1.0
4	苏航		3	4	1.0	2.0
5	王沛城		1	0	0.0	0.0
6	徐雅岚		1	0	0.0	0.0
7	魏天铖		1	0	0.0	0.0