鸡HNF1α在大肠杆菌中的表达及其纯化

• 作者: 张燕萍 张芸 李洁 王中亮 郁建锋 顾志良 龚道清
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡 HNF1α 重组蛋白 诱导表达 纯化
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 469-475
• 页数: 7页
• 分类号: S831.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2018.03.012

摘要

肝细胞核因子1α (hepatocyte nuclear factor 1α,HNF1α)调控众多的肝脏特异性基因,参与机体的脂类、糖类和蛋白质的代谢过程.以PCR技术从本研究室己构建的真核表达载体pcDNA3.1-HNF1α质粒上扩增获得鸡(Gallusg allus)HNF1α的编码序列,在其5’、3’端分别引入的Nde I和Xho I酶切位点,以此位点将其克隆入pET30a表达载体,并构建获得重组表达菌BL21-pET30a-HNFJα.然后以不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy1-β-D-thiogalactoside,IPTG) (0.1～0.8 mmol/L)优化重组蛋白的诱导表达,并采用15℃的低温诱导重组蛋白的可溶性表达.十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot分析结果显示,与未诱导组相比,重组表达菌在37℃下,经不同浓度的IPTG诱导4h后均能产生一条约69 kD的蛋白条带,与预计目的蛋白HNF1α的大小相一致,且IPTG浓度在0.1mmol/L时诱导重组蛋白的量高于其他浓度组,而低温诱导未能使重组蛋白可溶性表达.于是采用8 mol/L尿素变性包涵体,溶解重组蛋白,通过融合在HNF1α重组蛋白C端的6-His多肽,以Ni2+对重组蛋白进行亲和层析纯化,结合固—液两相法对目的蛋白进行原位复性.结果显示通过Ni2+亲和层析和目的蛋白原位复性相结合的一步纯化法,成功地从包涵体中获得了纯度高达95％以上的重组蛋白HNF1α,这为研究鸡HNF1α在糖脂代谢、机体生长及抗体的制备等方面提供了物质保障.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龚道清	扬州大学动物科学与技术学院	148	1242	17.0	28.0
2	张燕萍	常熟理工学院生物与食品工程学院	38	168	7.0	11.0
3	顾志良	常熟理工学院生物与食品工程学院	65	234	8.0	12.0
4	郁建锋	扬州大学动物科学与技术学院	53	317	10.0	15.0
8	张芸	常熟理工学院生物与食品工程学院	2	16	1.0	2.0
9	王中亮	常熟理工学院生物与食品工程学院	4	3	1.0	1.0
10	李洁	常熟理工学院生物与食品工程学院	5	8	2.0	2.0