miR-494及其靶基因JunD在损伤疝出型椎间盘突出中的表达及其临床意义

• 作者: 李鹏飞 王涛 田鹏 韩超 马信龙
• 来源期刊: 中华创伤杂志
• 关键词: 椎间盘移位 肿瘤坏死因子α JunD
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 457-464
• 页数: 8页
• 字数: 6034字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-8050.2018.05.013

摘要

目的 探讨miR-494及其靶基因JunD在损伤疝出型椎间盘突出(IDH)中的表达及其临床意义. 方法 收集脊柱爆裂骨折手术椎间盘标本6个,髓核细胞培养,不同浓度(0,10,50,100 ng/ml)肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导髓核细胞凋亡,建立髓核细胞凋亡模型,于不同时相点(0,8,16,24 h)采用qRT-PCR和流式细胞术检测髓核细胞凋亡率及miR-494的表达.AntigomiR-494在慢病毒包装后转染髓核细胞,成功敲除髓核细胞miR-494后使用TNF-α(100 ng/ml,16 h)诱导髓核细胞凋亡.采用随机数字表法进行实验分组:空白对照组(髓核细胞)、AntigomiR-494+ TNF-α组、阴性对照+TNF-α组.采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况.Western blot检测JunD蛋白和细胞色素C蛋白的表达情况.荧光素酶双报告基因分析技术及生物信息学方法了解miR-494与JunD基因的靶向关系. 结果 miR-494表达量及髓核细胞凋亡率随TNF-α浓度和刺激时间的增加而增加(P＜0.05).与阴性对照+TNF-α组相比,在细胞转染后,AntigomiR-494+ TNF-α组miR-494表达量和细胞凋亡率明显下降(P＜0.05).Westernblot结果表明,AntigomiR-494+ TNF-α组JunD蛋白的表达水平较阴性对照+TNF-d组高(P＜0.05),而细胞色素C蛋白的表达水平较阴性对照+TNF-α组低(P＜0.05).荧光素酶双报告基因验证、生物信息学方法预测证实miR-494直接靶向JunD. 结论 TNF-α可诱导髓核细胞的凋亡,且呈时间和剂量依赖性.髓核细胞miR-494的表达量随TNF-α的刺激浓度、时间增加而增加.miR-494有可能是髓核细胞在TNF-α诱导下凋亡的关键调节器.miR-494基因敲除可以保护髓核细胞,其可能机制是上调靶基因JunD,并且介导细胞色素C凋亡通路.miR-494-JunD-细胞色素C信号通路可能是椎间盘退变的潜在机制之一.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马信龙	天津医院脊柱外科	79	786	16.0	23.0
2	韩超	天津医院脊柱外科	5	59	4.0	5.0
3	王涛	天津医院脊柱外科	5	9	2.0	3.0
4	田鹏	天津医院脊柱外科	4	46	3.0	4.0
5	李鹏飞	天津医院脊柱外科	1	0	0.0	0.0