尼罗罗非鱼IgM单抗的制备及IgM+B淋巴细胞吞噬能力的研究

• 作者: 叶剑敏 吴丽婷 孔令贺 尹晓雪 杨延舰 王君如
• 来源期刊: 华南师范大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 尼罗罗非鱼 IgM 单克隆抗体 IgM+B细胞 吞噬能力
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 生物学与生物工程
• 页码范围: 60-68
• 页数: 9页
• 分类号: Q813.2
• 字数: 6745字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6054/j.jscnun.2018100

摘要

采用免疫亲和层析方法纯化尼罗罗非鱼抗TNP特异性IgM,并以此为抗原免疫Babl/c小鼠进行单克隆抗体制备.免疫的小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合成杂交瘤细胞,利用酶联免疫吸附法、蛋白质印迹法(West-ern Blot)和流式细胞术筛选获得2株抗IgM重链的单克隆抗体,分别命名为3B3和9D12.纯化后的单克隆抗体3B3和9D12在1 g/L质量浓度下的抗体效价分别为740 741和359 712 unit/mL.利用制备的单抗结合激光共聚焦显微镜检测发现,膜结合型IgM位于B细胞膜表面(IgM+B细胞).流式细胞术检测尼罗罗非鱼IgM+B细胞的免疫组织分布,发现IgM+B细胞分布存在组织差异性,其中在外周血(PBL)所占比例最大,约为37.6％,其次是脾脏(SPL),占33.7％,头肾(AK)约为23.9％,而后肾(PK)约为20％.对IgM+B细胞荧光微球的吞噬能力分析发现,IgM+B细胞对0.5 μm的荧光微球吞噬能力强于1.0μm的荧光微球.另外,IgM+B细胞的吞噬能力存在免疫组织差异性,其中对于0.5 μm荧光微球的吞噬能力,PBL明显高于其他组织,而AK IgM+B细胞对1.0 μm荧光微球的吞噬能力最强.以上结果表明:该研究成功地制备了鼠抗尼罗罗非鱼IgM单抗工具,并利用其IgM单抗发现IgM+B细胞具有吞噬能力,且其吞噬能力存在组织差异性,表明IgM+B细胞在先天性免疫中可能发挥重要作用.