粘质沙雷氏菌中果糖-1,6-/景天庚酮糖-1,7-二磷酸两个双功能酶的研究

• 作者: 何远志 刘文君 张燎原 杨天行 林辉 胡开辉 金文松 高慧芳
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 粘质沙雷氏菌 景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶 果糖-1,6-二磷酸酶 异源表达 酶学特性
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 441-449
• 页数: 9页
• 分类号: Q814.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2018.05.0077

摘要

[目的]明确粘质沙雷氏菌中两个FBPases是否同时具有催化果糖-1,6-二磷酸(F-1,6-BP)与景天庚酮糖-1,7-二磷酸(S-1,7-BP)的功能.[方法]PCR构建pET28a-Sm-FBPase和pET28a-Sm-GlpX,IPTG诱导表达于大肠杆菌并应用镍柱纯化靶蛋白.应用体外酶学分析Sm-FBPase与Sm-GlpX酶学特性.[结果]SDS-PAGE结果表明Sm-FBPase、Sm-GlpX的分子量是45kDa、38 kDa.体外酶学分析表明两个酶均可催化F-1,6-BP和S-1,7-BP.Sm-GlpX是Mn2或Mg2+依赖型酶,而Sm-FBPase的激活需要Mn2.根据被测试的底物,Sm-FBPase最适pH 7.0～7.5、最适温度40℃;Sm-GlpX最适pH 8.0、最适温度40～45℃.当F-1,6-BP作底物时,Sm-FBPase与Sm-GlpX的Kcat/Km分别为6.88、7.55 S-1mmol-1 L.然而,当S-1,7-BP作底物时,Sm-FBPase与Sm-GlpX的Kcat/Km分别是3.17、8.54S-1mmol-1L.[结论]Sm-FBPase和Sm-GlpX均可催化F-1,6-BP与S-1,7-BP,Sm-GlpX催化S-1,7-BP的效率是Sm-FBPase的2.69倍.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡开辉		70	781	16.0	25.0
2	张燎原		14	47	5.0	6.0
3	林辉		41	245	9.0	15.0
4	刘文君		8	17	3.0	4.0
5	金文松		6	5	2.0	2.0
6	杨天行		1	0	0.0	0.0
7	何远志		1	0	0.0	0.0
8	高慧芳		1	0	0.0	0.0