ABO血型基因及亚型真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 冯智慧 焦淑贤 王同显 胡彬 逄淑涛
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 关键词: ABO血型基因 真核表达载体 转染 细胞系
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 64-68
• 页数: 5页
• 字数: 4626字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9406.2018.01.014

摘要

目的 构建人ABO血型A101、B101及其CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体,为研究ABO血型基因及亚型基因的功能奠定基础.方法 从已知ABO基因分型的标本中(A101,B101)提取总RNA,将其逆转录合成cDNA,经特异性引物扩增目的基因片段,将其定向连接到pcDNA3.1(+)真核表达载体;采用定点突变PCR的方法构建CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体,通过测序鉴定其序列正确.将ABO血型A101、B101及其CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体分别转染Hela细胞系,通过免疫荧光和Western印迹检测各ABO基因在细胞中的表达.结果 测序结果显示扩增到的A101及B101 cDNA以正确序列和方式插入载体,CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体的测序结果显示相应位点均成功突变;免疫荧光和Western印迹结果显示A101、B101及其CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型在Hela细胞中均有表达.结论 成功构建了ABO血型基因及亚型基因真核表达载体,体外转染Hela细胞成功表达糖基转移酶,为后续研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王同显	山东省青岛市中心血站输血医学研究所	4	2	1.0	1.0
2	冯智慧	山东省青岛市中心血站输血医学研究所	9	18	3.0	3.0
3	焦淑贤	山东省青岛市中心血站输血医学研究所	2	5	1.0	2.0
4	逄淑涛	山东省青岛市中心血站输血医学研究所	2	17	1.0	2.0
5	胡彬	山东省青岛市中心血站输血医学研究所	1	1	1.0	1.0