小鼠视锥细胞系661W细胞凋亡模型的构建及自噬对其的保护性作用

• 作者: 朱瑞琳 杜剑彤 杨柳 谢佳 高文娜
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 凋亡 自噬 661W细胞
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 666-675
• 页数: 10页
• 字数: 11032字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2018.09.003

摘要

目的 构建小鼠视锥细胞系661W细胞凋亡模型,探讨不同自噬水平下细胞生存状态的变化.方法 采用不同质量浓度抗Fas抗体处理细胞,采用Western blot法检测caspase-3蛋白表达量,并确定凋亡细胞模型适宜抗Fas抗体刺激浓度;分别采用不同浓度自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和自噬诱导剂雷帕霉素处理细胞,采用Western blot法检测细胞中微管相关蛋白质1轻链3(LC-3)Ⅱ/LC-3 Ⅰ蛋白表达,筛选合适的作用浓度.将细胞分为空白对照组、单纯3-MA组、单纯雷帕霉素组、模型对照组、模型+3-MA组、模型+雷帕霉素组,采用Western blot法检测各组细胞诱导后0、3、6、12、24和48 h caspase-3、caspase-8、自噬相关基因5(Atg-5)和LC-3Ⅱ/LC-3 Ⅰ蛋白表达,采用流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 成功构建661W细胞凋亡模型,抗Fas抗体的适宜刺激质量浓度为2.0μg/ml;在Fas抗体刺激下,661W细胞caspase-3、caspase-8相对表达量从6h开始增加,12h达高峰,并持续至48 h,而Atg-5和LC-3Ⅱ/LC-3 Ⅰ蛋白相对表达量从3h开始增加,24 h达高峰,并于48 h时降至基线水平.3-MA和雷帕霉素的适宜作用浓度分别为20 nmol/L和2.0 nmol/L.空白对照组、单纯3-MA组和单纯雷帕霉素组诱导后各时间点caspase-3、caspase-8的相对表达量及细胞凋亡率总体比较,差异均无统计学意义(均P＜0.05).单纯雷帕霉素组各时间点细胞Atg-5和LC-3Ⅱ/LC-3 Ⅰ蛋白相对表达量显著高于相应时间点空白对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).模型+3-MA组caspase-3、caspase-8相对表达量以及细胞凋亡率在诱导后3、6、12、24和48 h均显著高于模型对照组,Atg-5和LC-3Ⅱ/LC-3 Ⅰ的相对表达量在诱导后3、6、12和24 h均明显低于模型对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);模型+雷帕霉素组caspase-3、caspase-8相对表达量以及细胞凋亡率在诱导后6、12、24和48 h均显著低于模型对照组,Atg-5和LC-3Ⅱ/LC-3 Ⅰ的相对表达量在诱导后3、6、12和24 h均明显高于模型对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 在抗Fas抗体诱导661W细胞凋亡条件下,增强自噬可降低细胞凋亡率,而抑制自噬则会增加细胞凋亡率,自噬可能对661W细胞起到保护性作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨柳	北京大学第一医院眼科	53	299	9.0	15.0
2	朱瑞琳	北京大学第一医院眼科	11	6	2.0	2.0
3	高文娜	北京大学第一医院眼科	2	0	0.0	0.0
4	谢佳	北京大学第一医院眼科	2	0	0.0	0.0
5	杜剑彤	北京大学第一医院眼科	2	0	0.0	0.0