摘要:
目的 检测miR-27a在犬上颌窦黏膜干细胞(maxillary sinus membrane stem cells,MSMSCs)成骨分化过程中的表达情况,探讨其在犬上颌窦黏膜干细胞成骨分化中的作用.方法 体外培养犬上颌窦黏膜干细胞,经成骨诱导培养后,RT-PCR检测miR-27a的表达.犬上颌窦黏膜干细胞转染pre-miR-27a和anti-miR-27a后,RT-PCR检测Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)mRNA的表达,Western blot检测Runx2和OPN蛋白的表达.转染pre-miR-27a的细胞成骨诱导培养后与Bio-Oss复合,建立裸鼠皮下异位成骨模型,观察miR-27a体内抑制成骨情况.结果 犬上颌窦黏膜干细胞经成骨诱导培养后,miR-27a表达量降低.miR-27a 1 d(tD=3.795,P=0.023),3 d(tD=4.493,P=0.011),7 d(tD=11.591,P<0.001),14 d(tD=12.542,P<0.001),21 d(tD=5.621,P=0.008)的表达量均高于0 d组.转染pre-miR-27a的犬上颌窦黏膜干细胞经成骨诱导培养后,与阴性对照组相比,成骨标志物Runx2 mRNA(t=4.923,P=0.007)及蛋白(t=4.425,P=0.008)和OPN mRNA(t=5.253,P=0.006)及蛋白(t=5.132,P=0.006)表达量明显降低.相反,转染anti-miR-27a的犬上颌窦黏膜干细胞经成骨诱导培养后,Runx2(t=3.925,P=0.013)和OPN(t=3.712,P=0.019)mRNA表达量比阴性对照组明显升高.单纯培养细胞与Bio-Oss复合后,在裸鼠皮下有成骨表现;但转染pre-miR-27a的犬上颌窦黏膜干细胞与Bio-Oss复合后,犬上颌窦黏膜干细胞在裸鼠皮下异位新骨形成面积减少(t=7.219,P=0.002).结论 miR-27a负向调控上颌窦黏膜干细胞成骨分化.