多种一步法快速提取DNA对肺炎支原体PCR检测的影响

• 作者: 刘立雍 单小云 张军鸽 赵飞 马闪珊
• 来源期刊: 疾病监测
• 学科: 生物学
• 关键词: 一步提取法 肺炎支原体 聚合酶链反应 临床标本
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 503-509
• 页数: 7页
• 分类号: Q503
• 语种: 中文

摘要

目的 对比不同一步法提取DNA在肺炎支原体PCR检测中的效果及应用范围,为临床标本中肺炎支原体的检测提供依据.方法 以两种经典的DNA提取一步法(ROSE和Chelex-100法)及其优化方案和商品化DNA提取试剂盒,提取肺炎支原体纯培养菌株及30份肺炎支原体阳性临床咽拭子标本DNA,分别进行普通PCR和荧光PCR检测,对比不同方法提取的DNA对PCR检测结果的影响.结果 ROSE法和Chelex-100一步法中的SDS严重影响Taq酶活性,提取物稀释100倍方可进行荧光PCR扩增,稀释10倍可用于普通PCR扩增.改良的Chelex-100一步法提取肺炎支原体纯菌DNA产量最高,且PCR扩增效果最好.对于30份临床标本来说,试剂盒法、改良Chelex-100法和水煮法的阳性率分别为100.00％(30/30)、80.00％ (24/30)和43.33％(13/30),且对相同肺炎支原体阳性标本提取的DNA,试剂盒法检测的循环阈值(Ct值)比上述两种方法分别小1.95和2.38.结论 经典一步法提取的DNA必须经稀释后方可作为扩增模板.改良的C helex-100法操作简便,可用于纯菌培养的DNA提取.临床标本中肺炎支原体DNA提取以试剂盒法最优,改良的Chelex-100法提取的DNA也可用于临床标本中肺炎支原体的检测,但不可用于定量分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	单小云	浙江省金华市中心医院检验科	13	58	4.0	7.0
2	赵飞	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	36	130	7.0	10.0
3	张军鸽		2	6	1.0	2.0
4	刘立雍	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	4	2	1.0	1.0
5	马闪珊	浙江省金华市中心医院检验科	4	10	2.0	3.0