miR-let-7b慢病毒载体促进大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化

• 作者: 周雪颖 孙经淞 曲宴慧 曲淑贤 朴丰源 李双月 邵颖
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: 骨髓间充质干细胞 miR-let-7b 神经元 诱导分化 慢病毒
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1146-1152
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2018.07.0360

摘要

微小RNA在生命体生长、衰老的过程中起着重要的作用,参与骨髓间充质干细胞(MSCs)重要的生物学进程,包括增殖、分化、信号转导和死亡等.该文探讨了miR-let-7b对-MSCs来源神经细胞的调控作用.体外分离、扩增大鼠MSCs,通过细胞形态学观察、表面标志物的流式细胞仪检测进行鉴定.将MSCs分为miR-let-7b+组、miR-let-7b-组和对照组,分别转染miR-let-7b慢病毒载体、Anti-rno-miR-let-7b Inhibitor载体及不进行任何转染操作,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞miR-let-7b的表达水平,确认转染情况.多因子联合法诱导各组MSCs向神经细胞分化,RT-qPCR检测神经细胞标志物MAP-2的表达,免疫细胞化学染色检测神经原特异性烯醇化酶(NSE)的表达和各组MSCs的神经细胞分化率.分离培养的MSCs在镜下呈长梭形或成纤维细胞样,CD90、CD44阳性表达率均大于90％,CD45的表达不足2％,证实得到的细胞即为MSCs. RT-qPCR结果显示,与对照组相比,miR-let-7b+组的miR-let-7b表达水平升高,miR-let-7b-组几乎未检测到miR-let-7,提示miR-let-7b载体及miR-let-7b Inhibitor载体均成功转染了MSCs.经诱导分化后,与对照组相比,miR-let-7b+组神经细胞标志蛋白SIM312、Gap43、MBP和NSE与对照组相比表达水平显著升高(P＜0.05);miR-let-7b-组SIM312、Gap43、MBP和NSE表达水平与miR-let-7b+组相比具有明显差异(P＜0.05).结果提示,miR-let-7b可以促进MSCs向神经细胞分化,通过控制miR-let-7b的水平可以调控MSCs的神经细胞分化率.