Clostridium clariflavum GH10木聚糖酶的克隆表达、酶学性质及位点功能分析

• 作者: 刘雨露 唐蕾 王华广 胡方觊
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: Clostridium clariflavum Glycosyl hydrolase families 10木聚糖酶 大肠杆菌 定点饱和突变
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 16-23
• 页数: 8页
• 字数: 4894字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.016821

摘要

首次将来源于Clostridium clariflavum的木聚糖酶基因Clocl-2441中的糖苷水解酶家族10(glycosyl hydrolase families,GH)结构域基因连接到pET28a(+)载体上,在E.coli BL21(DE3)成功异源表达.经镍柱和脱盐分离纯化达到电泳纯,并对其酶学性质进行解析.结果表明,重组木聚糖酶rXyn2441 GH 10最适温度和pH分别为70℃和7.0,属于中性嗜热木聚糖酶.rXyn2441 GH 10在65℃以下和pH 4.0 ～9.0范围比较稳定,金属离子中5 mmol/L的Mg2可以提高79.2％的酶活.以榉木木聚糖为底物重组酶的动力学参数,Vmax为1 691.5μmol/(mg·min),Km值为2.5 mg/mL,kcat为1 236.4/s,kcat/Km为494.6 mL/(mg·s).定点饱和突变表明209位点的组氨酸对酶活有重要的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐蕾	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	43	191	8.0	11.0
5	刘雨露	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	2	3	1.0	1.0
6	王华广	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	2	3	1.0	1.0
7	胡方觊	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	3	6	2.0	2.0