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意大利蜜蜂N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及性质分析
意大利蜜蜂N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及性质分析
作者:
张伟妮
张梦馨
胡崇伟
韩威超
黄小红
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
意大利蜜蜂
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶
纯化
性质分析
动力学
摘要:
[目标]N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖糖苷酶(NAGase)是一种重要的几丁质分解酶,能从N-乙酰葡萄糖苷的非还原端催化去除β-1,4-N-乙酰-D-氨基葡萄糖残基,参与了昆虫外骨骼的蜕皮过程.研究蜜蜂该酶的特征有助于阐明其在蜜蜂发育过程中的作用机制.[方法]采用40%-70%硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析和葡聚糖G-100凝胶过滤层析的方法从意大利蜜蜂Apismellifera ligustica幼虫体内分离纯化NAGase.以对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物检测该酶的活力,用native PAGE和SDS-PAGE检测酶的纯度.IEF-PAGE测定该酶等电点.葡聚糖G-200凝胶过滤层析测定酶的总分子量.[结果]结果显示,纯化的NAGase酶的比活力为803.09 U/mg,总分子量为77.3 kD.结合SDS-PAGE表明该酶由两个具有相同分子量(39 kD)的亚基组成.该酶等电点为4.8.酶水解底物pNP-NAG的过程遵循米氏方程,米氏常数(Km)和最大反应速度(Vm)分别为0.11 mmol/L和17.65 μmol/L·min.该酶水解反应的最适pH和最适温度分别为pH5.5和60℃.酶催化pNP-NAG反应的活化能为64.8 kJ/mol.pb2+,Cu2+,Zn2+和Al3+对该酶有不同程度的抑制作用.[结论]本研究描述了意大利蜜蜂NAGase的分离纯化方法及其理化性质,为进一步进行蜜蜂NAGase的结构解析和功能研究奠定基础.
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文献信息
篇名
意大利蜜蜂N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及性质分析
来源期刊
昆虫学报
学科
生物学
关键词
意大利蜜蜂
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶
纯化
性质分析
动力学
年,卷(期)
2018,(10)
所属期刊栏目
生理与生化
研究方向
页码范围
1153-1159
页数
7页
分类号
Q556.2
字数
语种
中文
DOI
10.16380/j.kcxb.2018.10.004
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
张伟妮
福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室
24
264
9.0
16.0
2
黄小红
福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室
58
436
12.0
18.0
3
胡崇伟
福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室
14
17
2.0
3.0
4
张梦馨
福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室
1
0
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韩威超
福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室
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二级参考文献(0)
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意大利蜜蜂
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶
纯化
性质分析
动力学
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研究来源
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研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
昆虫学报
主办单位:
中国科学院动物研究所
中国昆虫学会
出版周期:
月刊
ISSN:
0454-6296
CN:
11-1832/Q
开本:
16开
出版地:
北京市朝阳区北辰西路1号院5号中国科学院动物研究所
邮发代号:
创刊时间:
1950
语种:
chi
出版文献量(篇)
3602
总下载数(次)
9
总被引数(次)
49239
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