家蚕miR-301对化学感受蛋白基因csp9表达的调控

• 作者: 乔惠丽 杨娟娟 王远卓 邢秋婷 阚云超 魏博帆
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 家蚕 miRNA 化学感受蛋白 靶基因 实时荧光定量PCR 双荧光素酶
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 1145-1152
• 页数: 8页
• 分类号: Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2018.10.003

摘要

[目的]探索家蚕Bombyx mori miRNAs对化学感受蛋白基因表达的调控作用,以进一步研究miRNAs及其靶基因在昆虫化学识别中的作用.[方法]利用生物信息学方法预测和筛选可能作用于家蚕化学感受蛋白CSPs基因家族成员的miRNAs;实时荧光定量PCR分析预测获得的候选miR-301和其作用的靶基因在家蚕成虫不同组织中的表达变化;构建miR-301预测靶基因3'-UTR的双荧光素酶报告载体,与合成的miR-301 mimics或阴性对照转染人胚肾细胞HEK293,通过双荧光素酶报告基因检测系统中荧光素酶活性变化检测miR-301对其靶基因表达的调控作用.[结果]生物信息学分析结果发现,家蚕化学感受蛋白基因csp9是miR-301的预测靶基因,二者的结合位点位于csp9的3'-UTR区.实时荧光定量PCR检测结果表明,miR-301在交配后家蚕雌雄成虫触角和雄成虫头部都显著上调表达,靶基因csp9在对应组织中表达则显著下调.二者共转染HEK293细胞后,双荧光素酶检测结果表明,miR-301可以通过与csp9 3'-UTR的互作,显著抑制上游荧光素酶报告基因的表达.[结论]家蚕化学感受蛋白基因csp9是miR-301的靶基因,miR-301通过与靶基因3'-UTR的结合,在翻译水平上抑制csp9的表达.