常规脂质体介导shRNA转染建立CYP2E1表达沉默的人肝实质细胞模型

• 作者: 全正扬 周明 孙震晓 李浩 李登科 王子建
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 脂质体转染 CYP2E1 shRNA 人肝实质细胞 G418 qRT-PCR
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 18-22,69
• 页数: 6页
• 分类号: R-33|Q78|R322.47|R329.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2018.01.004

摘要

目的:利用常规脂质体介导转染shRNA(short hairpin RNA)建立CYP2E1 (cytochrome P450 2E1)表达沉默的人肝实质细胞模型.方法:采用文献报道的CYP2E1的高效干扰位点,构建CYP2E1的shRNA干扰载体(shCYP2E1)以及同源无干扰作用的对照载体(shNC,non-specific control),并通过阳离子脂质体LipoFiterTM介导转染人肝实质L02细胞,通过绿色荧光蛋白报告基因的表达指示及G418筛选阳性克隆,qRT-PCR (quantitative reverse transcription polymerase chain reaction)测定稳定转染细胞系中CYP2E1的表达情况.结果:确定转染后G418最佳筛选浓度为400 μg/mL,维持浓度为200 μg/mL;获得了荧光表达率较高的L02-CYP2E1细胞(CYP2E1沉默组)和L02-NC细胞(转染对照组);qRT-PCR结果显示,所建细胞系L02-CYP2E1相对于L02-NC,其CYP2E1表达下调了近70％(P＜0.05),表明CYP2E1干扰表达细胞模型构建成功.结论:利用常规脂质体转染法成功转染人肝实质L02细胞CYP2E1 shRNA,建立了CYP2E1表达沉默的细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李浩	北京中医药大学生命科学学院	8	52	4.0	7.0
2	孙震晓	北京中医药大学生命科学学院	52	473	12.0	20.0
3	李登科	北京中医药大学生命科学学院	14	71	6.0	8.0
4	周明	北京中医药大学生命科学学院	7	21	2.0	4.0
5	王子建	北京中医药大学生命科学学院	4	18	2.0	4.0
6	全正扬	北京中医药大学生命科学学院	5	23	3.0	4.0