甜瓜细菌性果斑病菌MH21中γ-谷氨酰转移酶AcGGT3的异源表达与功能分析

• 作者: 任争光 杨静 母军霞 董雅容 赵晓燕
• 来源期刊: 北京农学院学报
• 学科: 农学
• 关键词: 细菌性果斑病 西瓜食酸菌 γ-谷氨酰转移酶 异源表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 27-31
• 页数: 5页
• 分类号: S436.631
• 字数: 4208字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13473/j.cnki.issn.1002-3186.2018.0205

摘要

[目的]为了探索γ-谷氨酰转移酶(Gamma-glutamyltransferase,GGT)在甜瓜细菌性果斑病菌(Acidovorax citrulli)中的作用.[方法]以A.citrulli MH21菌株的DNA为模板,设计引物对Acggt3基因进行PCR扩增,克隆到蛋白表达载体pET22b(+)上,并进行测序和生物信息学分析.将重组质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3)中异源表达并纯化AcGGT3蛋白,用分光光度计法测定了不同温度和pH值条件下AcGGT3的酶活性.[结果]氨基酸序列分析结果显示,AcGGT3在Acidovorax属细菌中保守,并具有N末端信号肽.用IPTG诱导的方法成功表达并纯化出AeGGT3蛋白.酶活检测发现该蛋白在37℃时酶活性最高,最适pH为8.0.[结论]首次在A.citrulli菌株中克隆了γ-谷氨酰转移酶基因,并探索了AcGGT3蛋白的生物学特性,为下一步研究其致病功能莫定基础.