肝脏特异性CD36基因敲除小鼠的制备及鉴定

• 作者: 张晓玉 曾晗 杨萍 苏春晓 阮雄中 陈压西
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: CD36基因 基因敲除 Cre/Loxp
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 26-33
• 页数: 8页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20180804

摘要

目的:运用Cre/Loxp重组酶系统构建肝脏特异性CD36基因敲除小鼠并进行鉴定和验证,为研究CD36的生物学功能奠定基础.方法:构建CD36打靶载体,电转转染胚胎干细胞,通过长链PCR筛选出正确同源重组的阳性克隆,阳性胚胎干细胞克隆经扩增后,注射入C57 BL/6J小鼠的囊胚中,获得嵌合小鼠,再与Flp小鼠交配筛选获得Flox杂合子小鼠,该小鼠与引进的Alb-Cre小鼠交配,在F3代获得CD36fl/fl:Alb-Cre+基因型小鼠,即为肝脏特异性CD36敲除小鼠.采用PCR鉴定小鼠基因型,PCR、实时荧光定量PCR和Western blot验证小鼠肝脏CD36敲除效果,Western blot检测小鼠肾脏、脂肪和心肌组织CD36表达情况,HE染色观察小鼠肝脏形态学改变.结果:建立了CD36基因的Flox杂合子小鼠,与Alb-Cre小鼠交配后,在F3代筛选出CD36fl/fl:Alb-Cre-和CD36fl/fl:Alb-Cre+基因型小鼠,DNA水平证实CD36fl/fl:Alb-Cre+基因型小鼠肝脏CD36基因通过Cre/Loxp重组酶系统被敲除.与CD36fl/fl:Alb-Cre-基因型小鼠相比,CD36fl/fl:Alb-Cre+基因型小鼠肝脏CD36mRNA和蛋白表达水平显著降低,肾脏、脂肪和心肌组织CD36蛋白表达无差别,肝脏形态学特征无明显差异结论:通过Cre/Loxp重组酶系统成功构建了肝脏特异性CD36基因敲除小鼠,为研究CD36在肝脏代谢和肝脏疾病中的功能提供了动物模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈压西	重庆医科大学脂糖代谢性疾病重庆市重点实验室脂质研究中心	56	326	11.0	16.0
2	阮雄中	重庆医科大学脂糖代谢性疾病重庆市重点实验室脂质研究中心	28	53	4.0	6.0
3	苏春晓	重庆医科大学脂糖代谢性疾病重庆市重点实验室脂质研究中心	1	2	1.0	1.0
4	张晓玉	重庆医科大学脂糖代谢性疾病重庆市重点实验室脂质研究中心	1	2	1.0	1.0
5	曾晗	重庆医科大学脂糖代谢性疾病重庆市重点实验室脂质研究中心	1	2	1.0	1.0