牦牛精子总RNA提取方法的研究

• 作者: 凌笑笑 吴晓云 唐朋 梁春年 王宏博 褚敏 阎萍
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 牦牛 精子 RNA RT-PCR 45％ Percoll
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 繁殖生理
• 页码范围: 48-52
• 页数: 5页
• 分类号: S823.3
• 字数: 4123字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19556/j.0258-7033.2018-02-048

摘要

实验旨在制备并获得足够数量和高质量的牦牛精子总RNA,经3倍体积45％ Percoll单层梯度液纯化牦牛精子后,采用试剂盒(RNeasy Kit)、热TRIzol和TRIzol一步法分别提取精子总RNA,使用超微量紫外分光光度计分析,并进行RT-PCR和凝胶电泳.结果表明:纯化的牦牛精子中体细胞基本去除;3种方法提取精子总RNA均无基因组DNA污染,可获得GAPDH基因条带(126 bp);与热TRIzol和TRIzol一步法相比,试剂盒提取的总RNA(OD260/280=1.89,浓度为0.33 μg/l0 7精子)质量更高(P＜0.05),且能扩增出完整的β-actin、SRY、RPS23基因3条带.结果显示,试剂盒能获得高质量的牦牛精子总RNA,其纯度和完整性高,为后续分子生物学研究奠定基础.