海豚链球菌兼职蛋白FBA的克隆表达、抗原性检测 及免疫效果评价

• 作者: 刘韬 段靖 汪开毓 王二龙 王亚军 陈德芳
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 斑点叉尾鮰 海豚链球菌 兼职蛋白 原核表达 候选疫苗
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 页码范围: 1454-1462
• 页数: 9页
• 分类号: Q785|S917
• 字数: 7181字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20171011002

摘要

为检测斑点叉尾鮰源海豚链球菌兼职蛋白(fructose-1,6-bisphosphate aldolases,FBA)的抗原性和潜在的疫苗价值,本实验克隆得到斑点叉尾鮰源海豚链球菌DX09(基因组登陆号LXQF01)的fba基因序列(基因登录号A7N10_RS06935),对克隆序列进行生物信息学分析,并通过原核表达得到重组FBA蛋白(rFBA),制备了兔抗rFBA血清用于FBA蛋白抗原性检测,同时通过免疫保护实验评估重组蛋白的免疫保护效果.结果显示,海豚链球菌DX09 fba基因有1个882 bp的开放阅读框(ORF),编码293个氨基酸.生物信息学分析显示,其分子式为C1378H2172N368O422S8,分子质量为30.9 ku,理论等电点为5.01,不具有信号肽和跨膜区域;具有保守的裂解酶结构域,且与其他来源的FBA蛋白同源性达100％;具有较高的抗原指数,表明其可形成多个抗原表位.SDS-PAGE检测发现,诱导表达的重组蛋白以包涵体的形式出现在沉淀中,大小约为47 ku.Western blot分析表明,兔抗rFBA血清能特异性结合菌体蛋白.同时免疫保护实验显示,重组蛋白对斑点叉尾鮰的相对保护率可达55％,免疫后鱼体抗体水平相对对照组显著升高.本研究表明,原核表达的斑点叉尾鮰源海豚链球菌DX09 rFBA具备较好的抗原性和免疫保护作用,具有研发斑点叉尾鮰海豚链球菌亚单位疫苗的潜在价值.