草莓AP2/ERF转录因子AD-cDNA文库的构建

• 作者: 张圆圆 张祖瑛 李绍佳 殷学仁 肖宇玮 陈昆松
• 来源期刊: 果树学报
• 学科: 农学
• 关键词: 草莓 AP2/ERF转录因子 cDNA文库 酵母单杂交技术
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 种质资源·遗传育种·分子生物学
• 页码范围: 777-784
• 页数: 8页
• 分类号: S668.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.13925/j.cnki.gsxb.20170468

摘要

[目的]探究AP2/ERF家族成员在果实成熟过程中发挥的作用.[方法]利用CTAB法提取栽培草莓(Fragaria×ananassa)品种‘越心’的果实RNA,逆转录第1链cDNA;根据AP2 DNA-binding domain序列信息利用CDART工具在Genbank中获得草莓中所有AP2/ERF家族成员的序列信息,设计基因编码区全长引物并获得所有家族成员全长序列;将AP2/ERF家族成员基因全长序列从测序载体pGEM-Teasy转移至pGADT7载体上,转化至大肠杆菌并保存菌株,构建完整的AP2/ERF AD-cDNA文库;参照YeastmakerTM yeast transformation system2 (Clontech)说明书,利用DkPDC2启动子进行文库筛选和单一验证.[结果]从数据库获得了草莓(Fragaria×ananassa)基因组120个非冗余AP2/ERF家族成员基因全长序列,通过设计的7条引物将AP2/ERF家族成员基因全长序列从测序载体pGEM-T easy转移至pGADT7载体上,转化至大肠杆菌并保存菌株,构建了完整的AP2/ERF的AD-cDNA文库.利用已报道能与DkERF19互作的柿子基因DkPDC2启动子对该文库进行酵母单杂交筛选,获得了2个草莓AP2/ERF家族成员FaERF#83和FaERF#87,且证明了两者均能与DkPDC2启动子互作.[结论]成功构建了一个只含有草莓AP2/ERF转录因子全长序列的AD-cDNA文库,用DkPDC2启动子进行筛选获得了DkERF19直系同源基因FaERF#87和同亚家族基因FaERF#83,证明了该文库的有效性,也为进一步研究潜在的AP2/ERF调控提供了手段.