CAR-T细胞制备过程中磁珠法激活T细胞条件的优化

• 作者: 丁乾 于长明 张晓鹏 张章 徐俊杰 王晶 王潇霖 邱顺芳
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: CAR-T细胞 CD3 CD28 细胞激活 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 789-795
• 页数: 7页
• 分类号: R329.2
• 字数: 3675字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2018.06.012

摘要

目的:研究CAR-T细胞制备过程中,磁珠法体外激活人类原代T细胞的最佳条件.方法:新鲜分离的人外周血单个核细胞(PBMCs)与anti-CD3/CD28抗体包被的Dynabeads磁珠按3种不同的比例,于22℃混合孵育30 min,以激活T细胞.随后,通过细胞自动计数,检测不同激活条件对细胞活力和直径的影响;利用流式细胞术检测CD3+T细胞所占比例;连续监测并绘制T细胞生长曲线,分析激活条件对T细胞增殖速度的影响.结果:以3种激活条件处理的细胞,在激活早期,细胞活力随着磁珠数的增加而降低;流式细胞术检测结果表明,随着磁珠数的降低,CD3+T细胞所占比例呈上升趋势.然而,只有当PBMCs数与磁珠数比例为1:1时,T细胞的生长速度最快,在第15 d时可扩增50倍.结论:T细胞激活条件对细胞活力及增殖有重要影响,PBMCs数与磁珠数比例为1:1有利于T细胞快速扩增,这对在较短时间内获得足够的T细胞,缩短整个CAR-T细胞制备周期具有较重要的意义.