利用CRISPR/Cas9慢病毒系统构建肺部EZH2基因敲除小鼠

• 作者: 刘喆 周清华 孟凡荣 赵丹
• 来源期刊: 中国肺癌杂志
• 关键词: CRISPR/Cas9系统 EZH2 sgRNA 基因敲除
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 358-364
• 页数: 7页
• 字数: 5948字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2018.05.02

摘要

背景与目的 已有的研究证明CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated 9)系统是一种能够在哺乳动物细胞中高效操作的新型基因编辑技术,应用人工设计的向导RNA (single-guide RNA, sgRNA)介导外源表达的Cas9蛋白与靶点DNA特异性结合以实现对基因组DNA的切割,被切割后的基因组DNA通过非同源重组或同源重组的方式进行修复,从而实现基因的敲除、或者外源基因的敲入等目标.本研究的目的是应用CRISPR/Cas9技术构建小鼠肺部EZH2基因敲除的动物模型.方法 针对EZH2基因的编码区,设计两个靶向EZH2基因Exon3和Exon4的sgRNA,通过慢病毒包装、感染细胞、SURVEYOR assay等一系列体外实验,验证所设计的sgRNA的有效性.应用支气管插管的方式把慢病毒灌注到小鼠肺部,利用免疫组化方法和qRT-PCR进行检测.结果 NIH-3T3细胞的体外实验结果验证了实验所设计的sgEZH2能够有效地在体外细胞系中介导Cas9切割靶DNA;小鼠支气管插管实验及肺部组织免疫组化和qRT-PCR方法检测EZH2基因敲除的效率,发现实验组小鼠肺部组织EZH2表达明显降低.结论 本研究成功设计了两条能够敲除EZH2功能的sgRNA,并应用CRISPR/Cas9技术成功建立了肺部EZH2基因敲除的小鼠模型,为研究EZH2的功能和作用机制提供了有效的动物模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘喆		14	42	3.0	5.0
2	赵丹		6	24	3.0	4.0