分析超速离心技术研究膜蛋白TmrAB

• 作者: 于晓霞 周翠燕 张瑞轩 徐扬 李文奇 芦亚菲 褚文丹
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 关键词: 分析超速离心 分子排阻层析 冷冻电镜 膜蛋白 分子质量
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 1047-1053
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.16476/j.pibb.2018.0200

摘要

去垢剂在膜蛋白的提取纯化过程中起到必要的作用,对膜蛋白的聚合状态、结晶条件以及理化性质等方面都有较大影响.分析超速离心技术(analytical ultracentrifuge,AUC)通过测定溶液中膜蛋白-去垢剂复合物在离心场中的沉降运动轨迹,可以分析获得其沉降系数、摩尔质量、流体力学半径、结合常数等水力学和热力学性质,进而判断膜蛋白-去垢剂复合物的均一性及聚合状态.本文以嗜热菌来源的ATP结合转运蛋白(ABC transporter)TmrAB作为研究对象,利用分析超速离心技术结合分子排阻层析和冷冻电镜负染技术,研究其均一性、聚合状态以及去垢剂与膜蛋白的摩尔比.结果显示,在8倍临界胶束浓度(critical micelle concentration,CMC)的DDM条件下,TmrAB性质均一,并以异二聚体的单体形式存在,DDM与TmrAB的摩尔比为116∶1.本研究表明,分析超速离心技术是一种测定膜蛋白分子质量、研究膜蛋白聚合状态的可靠手段.