小菜蛾Cactus基因的克隆及表达模式研究

• 作者: 余静 李俊俊 许小霞 郑锦龙 金丰良 高延富
• 来源期刊: 环境昆虫学报
• 学科: 农学
• 关键词: 小菜蛾 Cactus 基因克隆 表达模式 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 161-172
• 页数: 12页
• 分类号: Q963|S433.4
• 字数: 9083字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-0858.2018.01.21

摘要

Cactus是昆虫NF-κB信号通路的核转录抑制因子(Inhibitor of nuclear transcription factor,IκB),可通过蛋白质间的相互作用与Toll信号通路中核转录因子(Nuclear transcription factor,NF-κB) Dorsal及Dif结合,从而调控抗菌肽基因的表达.为阐明Cactus在小菜蛾Toll信号通路中的功能,本研究利用RT-PCR结合RACE技术获得了小菜蛾Cactus基因的cDNA全长序列,命名为PxCactus(GenBank登录号:KY828920),其cDNA全长为1 868 bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)序列1 053 bp,编码350 aa.实时荧光定量PCR (qRT-PCR)对PxCactus的时空表达差异性检测表明,PxCactus基闪在小菜蛾不同的发育阶段都有表达,其中2龄幼虫表达量最低,4龄幼虫表达量最高;PxCactus在健康的4龄幼虫不同组织都有表达,其中在脂肪体中的表达量显著高于其它组织;在脂肪体中PxCactus的表达可以被Bacilhus thuringiensis和Serratia marcescens强烈诱导表达,而Metarhizium anisopliae抑制了PxCactus的表达.为了获得PxCactus的多克隆抗体,本实验构建了原核表达质粒pGEX-4T-PxCactus,并在大肠杆菌BL21 (DE3)中高效表达了融合蛋白GST-PxCactus,利用GST亲和柱纯化了融合蛋白,并免疫日本大耳兔制备了PxCactus多克隆抗体anti-PxCactus.ELISA和Western blot检测结果表明anti-PxCactus和PxCactus蛋白呈高效结合反应,表明已经成功制备的多克隆抗体;并利用Western blot检测到了小菜蛾脂肪体组织中的Cactus蛋白的表达.本研究成功克隆PxCactus基因及制备其多克隆抗体,为下一步研究PxCactus调控Toll信号传导,从而调控抗菌肽的表达奠定了分子基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金丰良	华南农业大学农学院广东省生物农药创制与应用重点实验室	6	19	3.0	4.0
2	余静	华南农业大学农学院广东省生物农药创制与应用重点实验室	2	3	1.0	1.0
3	高延富	华南农业大学农学院广东省生物农药创制与应用重点实验室	2	3	1.0	1.0
4	李俊俊	华南农业大学农学院广东省生物农药创制与应用重点实验室	1	2	1.0	1.0
5	郑锦龙	华南农业大学农学院广东省生物农药创制与应用重点实验室	1	2	1.0	1.0