沉默MCM7基因介导AKT信号通路参与黑色瘤细胞增殖及凋亡的实验

• 作者: 严晓寒 冯浩 唐桦 廖阳英 徐晓芃 李蓝 肖伟荣
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 医学
• 关键词: MCM7基因 AKT信号通路 黑色素瘤 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 739-745
• 页数: 7页
• 分类号: R739.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2018.18.0318

摘要

目的 探讨MCM7基因沉默介导AKT信号通路参与人皮肤黑色素瘤细胞的增殖及凋亡.方法 构建MCM7基因和沉默MCM7基因表达的慢病-毒RNA(LV-shRNA-MCM7)的表达栽体;将A375细胞分为Control组、Empty vector转染组(空载质粒转染组)、siRNA(LV-shRNA-MCM7)转染组、siRNA NC(LV-shRNA-MCM7 negative control)转染组;MTT法检测每组细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡情况;划痕实验法检测细胞迁移能力;qRT-PCR法测定细胞中MCM7基因、AKT信号通路相关基因、Cyclin D1及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、caspase-3的相对表达量;Western blot法测定蛋白相对表达量.结果 沉默MCM7后,黑色素瘤细胞中的MCM7基因、Cyclin D1、Bcl-2、AKT信号通路相关基因AKT3的mRNA和蛋白相对表达量显著下调(P＜0.05);凋亡相关基因Bax、caspase-3的mRNA和蛋白表达量显著上调(P＜0.05);siRNA转染组凋亡率显著上升,G0/G1期细胞数目明显增多,S期细胞数目明显减少;细胞增殖、迁移能力显著下降(P＜0.05).结论 沉默MCM7基因抑制AKT信号通路的激活,从而抑制A375黑色素瘤细胞增殖、迁移,促进A375黑色素瘤细胞凋亡.