稳定表达SLAM受体的Vero和BHK21细胞系的建立及其对犬瘟热病毒分离效果的比较

• 作者: 代科 伍锐 文心田 文翼平 曹三杰 朱璐 杨振 燕霞 王正皓 赵勤 赵玉佳 黄小波
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 犬瘟热病毒 信号淋巴激活分子 Vero细胞系 BHK21细胞系
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1212-1221
• 页数: 10页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 6561字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.06.013

摘要

旨在构建稳定表达SLAM受体的SLAM-Vero细胞系和SLAM-BHK21细胞系,并比较其对犬瘟热病毒(CDV)野毒株的敏感性,为CDV野毒株的快速分离与研究提供一种有效的工具.将真核表达载体Pcag-SLAM 分别转染Vero细胞和BHK21细胞.经G418压力筛选结合有限稀释法筛选阳性克隆株,并通过RT-PCR 、间接免疫荧光鉴定(IFA)和Western blot等方法对稳定表达SLAM受体的SLAM-Vero 细胞系和SLAM-BHK21细胞系加以验证.应用这两种细胞系对3例临床犬瘟热病例的5种不同组织进行病毒分离,对分离得到的 CDV 进行RT-PCR及IFA 鉴定.结果显示,经 RT-PCR和 Western blot 验证,本研究成功构建出 SLAM-Vero 细胞系和SLAM-BHK21细胞系,SLAM-Vero细胞接种病毒12～24 h即可出现典型的CDV导致的细胞融合体CPE,利用SLAM-Vero细胞从3只CDV阳性犬的肺和脾中分离得到2株CDV,而SLAM-BHK21细胞、亲本Vero 细胞及亲本BHK21细胞未能分离出病毒.研究表明,与SLAM-BHK21细胞相比,SLAM-Vero细胞对CDV的分离率较高,并能产生明显的CPE.在分离CDV野毒株时,选择肺和脾更容易在SLAM-Vero细胞系上分离出病毒.