Transwell小室内建立小鼠成骨-破骨细胞共培养体系

• 作者: 唐永超 张顺聪 李大星 李永贤 罗培杰 莫凌 莫国业 郭丹青 郭惠智 马延怀
• 来源期刊: 中国骨伤
• 关键词: 成骨细胞 破骨细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 241-247
• 页数: 7页
• 字数: 5113字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-0034.2018.03.010

摘要

目的:Transwell小室内建立体外小鼠成骨-破骨细胞共培养体系,并检测体系对成骨及破骨细胞活性的影响.方法:体外培育小鼠成骨细胞MC3T3-E1和小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,RANKL诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7分化为成熟破骨细胞后,于Transwell小室内建立成骨-破骨细胞共培养体系.通过CCK-8实验、茜素红染色、TRAP染色检测细胞的成骨、破骨活性.采用PCR、Western-Blot方法检测成骨细胞MC3T3-E1中OPG、ALP、RANKL、TGF-b1的基因表达以及RANKL的蛋白表达,检测破骨细胞RANK、NF-κB的基因表达和蛋白表达.结果:小鼠成骨细胞MC3T3-E1和小鼠破骨细胞可在Transwell小室内建立共培养体系;共培养体系影响小鼠成骨细胞与破骨细胞的分化活性,镜下可见成骨细胞分化增多,破骨细胞分化稍减少.共培养体系中成骨细胞基因OPG (0.65 ±0.08)、ALP(0.16±0.01)较单独培养OPG(1.00±0.08)、ALP(1.01±0.16)表达下降,而TGF-b1 (4.42±0.21)、RANKL(4.12±1.04)较单独培养组TGF-b1 (1.00±0.10)、RANKL(1.00±0.09)表达上升;破骨细胞相关RANK (0.63±0.06)、NF-κB (0.64±0.08)基因表达较单独培养组的RANK(1.00±0.08)、NF-κB (1.00±0.09)下降,差异均有统计学意义.同时共培养组的OPG (0.43±0.05)、NF-κB (0.59±0.05)的蛋白表达较单独培养组的OPG(0.84±0.06)、NF-κb(1.13±0.03)减少;共培养组RANKL(0.54±0.03)的蛋白表达则较单独培养组的RANKL (0.31±0.03)增加,差异有统计学意义,均与基因表达变化趋势一致.结论:小鼠成骨细胞MC3T3-E1和小鼠破骨细胞可在Transwell小室内建立共培养体系,共培养体系中成骨细胞活性高于破骨细胞活性.