奶牛脂肪肝细胞模型的建立

• 作者: 吴庭才 张才 杨自军 林霖 爨淑楠 王宏伟 贾哲 邵琦 陈小燕
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 奶牛肝细胞 油酸钠 脂肪肝 细胞模型
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 临床兽医学
• 页码范围: 1023-1028
• 页数: 6页
• 分类号: S856.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2018.05.31

摘要

以改进的两步灌流法分离培养的肝细胞为研究对象,使用含油酸钠0,0.10,0.25,0.50,1.00 mmol/L的培养基对其诱导处理12 h,通过油红O染色和测定细胞内TG(甘油三脂)含量判断肝细胞脂肪蓄积情况,利用CCK-8法检测细胞的活性和测定细胞培养液中ALT、AST的活性判断细胞活性和损伤程度,选取油酸浓度较为适中的组别电镜观察肝细胞超微结构的变化,荧光定量PCR技术检测油酸钠对肝细胞PPARα,SREBP-lc和ChREBP转录水平的影响,结果显示经过消化、纯化获取高纯度、高活性的肝细胞;生化指标及油红O染色结果显示:0.25 mmol/L油酸钠在诱导肝细胞12h后对肝细胞损伤较小,肝细胞保持较高活性,且脂滴较明显.电镜观察结果显示:0.25 mmol/L组肝细胞线粒体空泡化严重,糖原颗粒较少的现象符合临床脂肪肝病理现象;关键脂氧化基因PPARα的表达水平升高,脂合成基因SREBP-1c、ChREBP表达水平与对照组明显降低.结果表明:油酸钠诱导奶牛肝细胞12 h时,0.25 mmol/L浓度的油酸钠为最佳建立体外奶牛脂肪肝细胞模型浓度.