西瓜花叶病毒抗血清制备及其应用

• 作者: 冀树娴 朱天生 李向东 王健 王姝雯 田延平
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 抗血清 外壳蛋白 原核表达 西瓜花叶病毒
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 植物病害及其防治
• 页码范围: 833-837
• 页数: 5页
• 分类号: S432.41
• 语种: 中文
• DOI: 10.13926/j.cnki.apps.000237

摘要

西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)是危害葫芦科作物的重要病毒.制备特异性强、效价高的抗血清对快速准确检测和鉴定WMV具有重要意义.本研究将WMV外壳蛋白(Coat protein,CP)基因克隆到原核表达载体pE-HISTEV获得pEHISTEV-WMV-CP.将pEHISTEV-WMV-CP转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导,成功表达出分子量约为36 kDa的蛋白,与预期WMV CP大小一致.切胶回收WMV CP,与等体积弗氏不完全佐剂充分乳化后免疫健康新西兰大白兔.Western blotting结果表明,制备的抗血清与WMV CP有反应,与同属的番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)和烟草花叶病毒属的黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)均无反应.酶联免疫吸附测定(PTA-ELISA)结果表明,本研究制备的WMV抗血清效价为1∶8 192,并且能够检测稀释512倍的病毒汁液.利用该抗血清对田间采集的10个RT-PCR检测为阳性的样品进行检测,全部呈现阳性.本研究利用大肠杆菌表达的CP制备的WMV抗血清具有较高的特异性和灵敏度.研究结果为WMV的快速检测和鉴定奠定了基础.